论文部分内容阅读
本课题主要通过体外孵育的方法研究了中药材远志中提取得到的11个化合物Sibiricose A4，Tenuifoliside A，Tenuifoliside C，Tenuifoliside D，3,6-二芥子酰基蔗糖，细叶远志皂苷，远志(口山)酮Ⅲ，Telephiose A，Telephiose C，Compound11，Compound4在体外经CYP450酶代谢的代谢稳定性及其对CYP450酶活性的影响。本研究首先建立了中药材远志中11个化合物及8种CYP450代谢酶探针底物代谢产物的HPLC检测方法。通过采用化学抑制剂实验、基因重组酶、相关性分析相结合的方法，研究远志中11个化合物在HLM中的代谢稳定性和参与其代谢的CYP450酶亚型。另外，本研究通过在体外人肝微粒体体系测定8种探针底物代谢产物乙酰氨基酚（CYP1A2）、7-羟基香豆素（CYP2A6）、6α-羟基紫杉醇（CYP2C8）、4’-羟基双氯芬酸（CYP2C9）、4’-羟基美芬妥英（CYP2C19）、右啡烷（CYP2D6）、6-羟基氯唑沙宗（CYP2E1）、1’-羟基咪达唑仑（CYP3A）的生成量的改变判断远志中的11个化合物对上述八种CYP亚型的活性的影响。 代谢稳定性研究结果表明，远志寡糖酯类化合物Tenuifoliside A（TESA）经CYP450酶代谢，生成一个新的代谢产物。化学抑制剂实验结果显示，和对照组相比，酮康唑（CYP3A特异性抑制剂）显著抑制了TESA的代谢，完全没有检测到代谢产物的生成。重组单酶实验结果显示，只有CYP3A4参与了TESA的代谢，而其它7个亚型均没有参与TESA的代谢。其中，TESA在混合人肝微粒体（HLMs）与重组CYP3A4中的代谢常数Km分别为89.50±3.50μmol·L-1, and96.59±8.71μmol·L-1；TESA在HLMs与CYP3A4中的Vmax分别为86.72±9.80 nmol·min-1·mg-1 P450和71.80±2.29 nmol·min-1·mg-1 pro。另外，通过LC-MS/MS的分析方法推测了代谢产物M-1的结构。结果显示，TESA经CYP3A4代谢后，生成一个在苯环A上单羟基化的代谢产物。其它研究的10个化合物均不被CYP450代谢。 该研究还包括中药材远志中提取得到的11个化合物对8种CYP450酶亚型活性的影响。 Sibiricose A4，Tenuifoliside A，3,6-二芥子酰基蔗糖，细叶远志皂苷，Compound11，Compound4对所研究的8种CYP450酶亚型活性没有明显影响。而寡糖酯类化合物Tenuifoliside C，Tenuifoliside D，Telephiose A，Telephiose C和远志(口山)酮Ⅲ对CYP4502E1催化的探针反应（氯唑沙宗6-羟基化）有抑制作用。其对CYP4502E1的抑制常数 IC50值分别为：38.73μmol·L-1、54.14μmol·L-1、61.77μmol·L-1、62.22μmol·L-1、50.56μmol·L-1。 该研究选取远志中含量较高的化合物进行了体外代谢稳定性实验及其对CYP450酶活性的影响。在研究的11个化合物中，只有TESA经CYP4503A4代谢后，生成一个单羟基化代谢产物；其中Tenuifoliside C，Tenuifoliside D，Telephiose A，Telephiose C和远志(口山)酮Ⅲ对CYP2E1的活性具有抑制作用。这些研究对TESA作为一个潜在的抗抑郁候选药物很有意义；远志中5个化合物对CYP2E1的抑制作用研究对含有这些化合物的药物或中药的临床应用也具有重要的实验价值。