茄子和矮牵牛U2AF<'65>同源基因的克隆及表达分析

来源 :中国科学院武汉植物园 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bombwang1986
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大多数真核生物的前体mRNA都含有内含子。前体mRNA删除内含子产生成熟RNA的剪接过程是真核生物基因表达的一个重要环节,也是进行基因表达调控的一个重要手段。因此真核基因剪接机制的研究具有重要的意义。   利用基因的同源性进行的同源基因克隆已经成为新基因克隆的有效策略。本研究通过生物信息学手段,利用烟草NpU2AF65 a和NpU2AF65 b基因的全长cDNA序列以及茄子BAC77N19(GenBank EF517791)的序列设计引物,采用RACE技术进行PCR扩增,获得茄子SmU2AF65基因的全长cDNA序列,该基因在GenBank中的登录号为Eu543263。茄子SmU2AF65基因与烟草NpU2AF65 a和NpU2AF65 b基因的cDNA序列分别具有87.77%和79.97%的序列一致性,与拟南芥AtU2AF65 a以及小麦TaU2AF65 a、TaU2AF65分别具有68.85%,63.36%,45.54%的序列一致性,而与人.HsU2AF65具有32.62%的序列一致性。RT-PCR分析表明茄子.SmU2AF65基因在茄子中呈组成型表达,且该基因通过可变剪接至少产生2个转录本,在根组织中产生与其他组织中不同的表达产物。此外,基于同样的技术手段,克隆了矮牵牛PhU2AF65基因1002 bp的3末端片段。该序列片段与茄子和烟草U2AF65同源基因具有90%以上的序列相似性,且包含3个保守的RRM结构域。半定量RT-PCR分析表明该基因在矮牵牛中成组成型表达,可能通过可变剪接产生多个转录本。   本研究中茄科植物U2AF65同源基因的克隆和其前体mRNA的组织特异性剪接模式为研究高等植物的mRNA剪接机制和基因表达调控模式提供一定的依据。
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