高原鼢鼠不同季节不同组织乳酸脱氢酶活力及同工酶谱的研究

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通过对低氧高二氧化碳环境中高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi)在不同季节血清中乳酸(Lactate,LD)含量、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)活力以及乳酸脱氢酶(LDH)同工酶谱的测定,探讨高原鼢鼠对低氧高二氧化碳的适应机制。 方法 断颈,取凝血,离心4000转10min后,取上清液,制备血清。用分光光度法测定血.清LD的含量、LDH活力,用连续聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定血清LDH同工酶谱,安装夹芯式垂直板电泳槽,制备分离胶和浓缩胶,待凝胶聚合后,取血清10uL,加入20uL40%蔗糖和50uL0.1%溴酚兰,混匀后,用微量注射器吸取6uL,加入凹形样品槽里。加样后,打开电源,将电流调至10 M A/板,待样品进入分离胶后,改为20-25M A/板,等清晰的兰紫色酶带出现距胶底1 cm处停止电泳。立即染色,脱色,将凝胶板放入保存液中浸泡2-3小时。然后对不同季节血清LDH同工酶谱进行比较性分析。 结果 高原鼢鼠血清中LD含量、LDH活力及LDH同工酶谱发生明显的季节性变化的趋势。LD含量、LDH活力在随着春季、夏季、秋季不同季节的变化而显著减小(P<0.05),血清中LD含量在春季、夏季和秋季分别为6.98±1.20mmol/L,6.65±1.80 mmol/L,3.17±0.38 mmol/L;LDH活力在春季、夏季和秋季分别为5865.79±1338.94 U/mg,4493.73±1153.47 U/mg,3338.11±523.74 U/mg。高原鼢鼠血清中LDH同工酶谱在不同的季节有不同的酶带,在春季LDH同工酶含有明显的5条区带,即LDH<,1>、LDH<,2>、LDH<,3>、LDH<,4>、LDH<,5>,均着色深且带型比较宽,夏季除LDH<,3>、LDH<,4>、LDH<,5>的区带着色变淡变窄外,LDH<,1>、LDH<,2>酶带几乎消失。秋季变化更明显,除LDH<,5>区带外,其他的酶带几乎消失。 结论 血清中LD含量、LDH活力以及血清中LDH同工酶谱随季节的变化而呈现明显变化的趋势。 目的:通过对低氧高二氧化碳环境中高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi) 不同组织乳酸脱氢酶 (LactateDehvdrogerlase,LDH)活力及同工酶谱在不同季节的变化,探讨高原鼢鼠特殊生存环境的特异生理机能和代谢机制。 方法 动物经5%J2戊巴比妥钠腹腔麻醉后,取每只高原鼢鼠心、肝、肺、肾、脑和骨骼肌6种组织,放入4℃预冷的0.9%NaCL(即生理盐水)中沈去血污,再称取各组织约0.5g,按w/v=1/4比例加入4℃预冷的0.9%NaCL2ml,用研钵冰浴匀浆,匀浆液置入试管中,经10000r/min离心20min,取上清液用于酶活力测定和LDH同工酶的电泳分析。 LDH酶活力测定:用0.1 mol/L PH7.5磷酸盐缓冲液在紫外可见分光光度计中340nm处调零,然后依次加入丙酉同酸钠溶液2.9ml,NADH0.1ml,摇匀后,每隔0.5min测340nM处的吸光值(A<,340nm>、}连续测定3min,计算A<,340nm/min>.减少值,可得细.织提取液中LDH活力(U/mL)。数据用SPSS Version11.0统计软件处理。 LDH同工酶的电泳分析:采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳分离法,浓缩胶浓度2.5%,分离胶浓度7.0%,电极缓冲液Tris-甘氨酸缓冲液,6ul点样。开始电泳时电流为10mA,待样品进入分离胶时,将电流调至25mA,约进行4小时左右。电泳结束后,取LDH胶片放入配好的染色液中,避光37℃20分钟。然后用水漂洗数次,放入保存液中保存。然后对不同季节血清LDH同工酶谱进行比较性分析。 结果 高原鼢鼠心、脑和骨骼肌LDH活力随着春季、夏季和秋季的变化显著减小(P<0.05)。骨骼肌各季组LDH活力高于心肌各季组LDH活力。在不同季节中,高原鼢鼠不同组织中LDH的同工酶谱带是不同的,存在着组织特异性。高原鼢鼠心和肾以LDH<,1>为主。在夏季,高原鼢鼠骨骼肌以LDH<,1>LDH<,3>为主。在春季、夏季和秋季中,高原鼢鼠LDH同工酶在不同组织中表现出分布特异性,并通过改变LDH活力和LDH同工酶,来维持机体的氧平衡。 结论 高原鼢鼠心、肝、肺、肾、脑、骨骼肌LDH活力及LDH同工酶随着春季,夏季和秋季的变化呈现出变化的趋势。LDH同工酶的基因表达,在春季,夏季和秋季三个季节中有着组织特异性的差异,不同组织的LDH活力及其LDH同工酶谱的变化与其生存的特殊环境的特异生理机能和代谢紧密相关。
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