肿瘤是威胁人类健康的重要疾病之一,其中胃癌的发病率及死亡率均据前列,在我国甚至居于消化系统首位。随着近年来胃癌诊断和治疗技术的不断提高,其发病率及死亡率均不断降低,但是目前绝大多数胃癌患者仍然是在中晚期才被发现确诊,因此其预后效果及生存期往往不甚理想。肿瘤细胞侵袭转移是中晚期肿瘤的重要标志,也是造成肿瘤患者治疗效果不佳甚至死亡的重要原因之一,因此,研究胃癌发展的机制,特别是侵袭转移的机制具有重大的科学及临床意义,相关结果将为探索新的胃癌治疗手段提供理论基础。脯氨酸具有特殊的侧链结构,蛋白质中的肽基-脯氨酰基序天然存在反式和顺式构象,而肽基-脯氨酰顺反异构酶(PPIases)能够催化其顺反构象的变化,进而调控蛋白质的折叠、稳定性、细胞定位及相互作用等。PIN1是PPIase家族一员,它是目前已知唯一能介导磷酸化的丝氨酸/苏氨酸-脯氨酸基序(p Ser/Thr-Pro)构象变化的PPIase。由于Ser/Thr-Pro基序广泛存在于蛋白质中,因此PIN1在众多的细胞过程中发挥重要的作用。其表达或活性的异常与多种疾病相关,其表达不足可导致阿尔兹海默病、帕金森综合征以及亨廷顿舞蹈症等,而高表达可导致系统性红斑狼疮和多种肿瘤的发生发展。最新的研究表明,PIN1在胃癌中高表达,它可以通过上调BRD4、PI3K/AKT以及Wnt/β-catenin等促进胃癌进展。但是PIN1在胃癌中高表达的机制,以及在胃癌侵袭转移中的作用还鲜有报道。据此,本课题拟首先阐明PIN1在胃癌侵袭转移中的作用,其次在转录后水平揭示PIN1在胃癌中高表达的机制。目的:阐明PIN1在胃中高表达的分子机制及其在胃癌侵袭转移中的作用。方法:1.采用q RT-PCR和Western Blot检测系列胃癌细胞株中PIN1的本底表达水平,然后在低表达的细胞株中过表达PIN1,在高表达细胞株中干扰PIN1。同时检测PIN1在临床胃癌和癌旁组织标本中的表达水平,验证PIN1在胃癌中的高表达;2.通过CCK-8及Transwell实验探索PIN1在胃癌增殖、侵袭和转移中的作用;3.不同数据库(mir Tarbase、mi Randa、Target Scan、mi RNApath和starbase)预测潜在靶向PIN1的microRNA,以取交集的方法筛出备选;4.通过qRT-PCR及Western Blot实验筛选出抑制PIN1表达的microRNA;5.采用RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)技术及双萤光素酶报告实验证明目标microRNA直接结合PIN1 m RNA的3’UTR并阐明结合位点;6.采用CCK-8及Transwell实验探索目标microRNA在胃癌增殖、侵袭和转移中的作用;7.通过CCK-8及Transwell实验确定目标microRNA通过抑制PIN1的表达发挥抑胃癌作用;8.检测目标microRNA在胃癌临床标本及组织芯片中的表达水平,比较癌和癌旁组织中表达水平的区别,并统计与PIN1表达、患者TNM分期以及肿瘤淋巴结转移的相关性。同时统计目标microRNA表达与患者生存期的感受性(ROC)曲线,并以此为标准统计目标microRNA表达水平与患者生存期的关系。结果:1.PIN1在胃癌临床标本以及胃癌细胞株中普遍高表达;2.PIN1显著促进胃癌的增殖、侵袭和转移;3.在胃癌细胞中mi R-628-5p直接抑制PIN1的表达;4.MiR-628-5p通过抑制PIN1进而抑制胃癌的增殖、侵袭和转移;5.MiR-628-5p在胃癌组织中普遍低表达,其表达水平与PIN1表达水平、患者TNM分期以及肿瘤淋巴结转移负相关,而与患者生存期正相关。MiR-628-5p表达水平与患者生存期ROC曲线下面积为0.7369。结论:本研究在细胞及临床标本水平验证了PIN1在胃癌中的高表达。高表达PIN1可以显著促进胃癌的增殖、侵袭和转移,而mi R-628-5p能够通过抑制PIN1进而抑制胃癌细胞的上述进展。MiR-628-5p的表达水平与PIN1表达、患者TNM分期以及肿瘤淋巴结转移负相关,而与患者的生存期正相关。MiR-628-5p表达水平与患者生存期的ROC曲线下面积为0.7369,提示以mi R-628-5p表达水平预测患者预后具有一定的准确性。但是,在胃癌组织中mi R-628-5p表达普遍低于癌旁组织,说明mi R-628-5p表达不足可通过促进PIN1表达进而促进胃癌进展。以上结果提示mi R-628-5p和PIN1可以作为胃癌治疗的潜在靶点以及预测预后的潜在标志。