重组POSTN蛋白调控TWIST1+/-小鼠冠状缝颅缝早闭的实验研究

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Saethre-Chotzen综合征作为最常见的综合征型颅缝早闭之一,目前仍以手术治疗方法为主,但同时伴随着高风险,并发症多,容易复发等问题,非手术治疗亟待探索和解决,本研究前期发现POSTN蛋白在颅缝早闭患者的颅缝组织中表达减少,提示其可能在颅缝早闭的发病机制和治疗中有重要作用。目的:本研究选取不同浓度重组POSTN蛋白处理TWIST1+/-小鼠(Saethre-Chotzen综合征的动物模型)冠状缝颅缝细胞,在体外观察其对细胞增殖、迁移以及成骨分化能力的影响,并在体内用重组POSTN蛋白对TWIST1+/-小鼠冠状缝早闭进行治疗,观察其对颅缝早闭的改善作用。方法:体外分离培养TWISTl+/-小鼠冠状缝颅缝细胞后,用Oμg/L,50μg/L,l00lμg/L,200μg/L的重组POSTN蛋白处理细胞,CCK-8检测细胞的增殖能力,细胞划痕实验和Transwell小室观察细胞迁移能力,茜素红染色,RT-qPCR和Western Blot检测细胞成骨诱导后的成骨分化能力,同时,体外用重组POSTN蛋白治疗TWIST1+/-小鼠后,Micro-CT观察小鼠冠状缝闭合情况,并计算骨体积分数,HE染色观察颅缝两侧成骨前缘的融合情况。结果:CCK-8结果表明POSTN蛋白对细胞增殖能力的抑制呈现时间和浓度依赖性,并且在200μg/L时最明显。细胞划痕实验和Transwell小室检测发现POSTN可抑制TWISTl+/-小鼠冠状缝颅缝细胞的迁移能力,但50μg/L,l00μg/L,200μg/L组之间的抑制效果没有统计学差异。茜素红染色,RT-qPCR和Western Blot显示细胞的成骨分化能力也受到抑制,在浓度为200μg/L的时候最为明显。Micro-CT结果发现POSTN治疗后TWIST1+/-小鼠冠状缝未完全闭合,和未治疗小鼠相比,骨体积分数也下降,HE染色显示成骨前缘没有完全融合。结论:体外结果显示,重组POSTN蛋白可抑制细胞增殖、迁移和成骨分化能力,体内结果表明重组POSTN蛋白可改善TWIST 1+/-小鼠冠状缝的颅缝早闭。
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