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目的:通过益气养阴解毒方对K562细胞增殖与凋亡影响的研究,探讨益气养阴解毒方对K562细胞增殖与凋亡的机制。
方法:本实验取12只大白兔,随机分为4组,①大剂量中药组:②中剂量中药组③小剂量中药组④空白对照组。各组每日早晚各一次,益气养阴解毒方药液灌胃3天后,第4天早上再给药一次(灌药前禁食12小时) ,于最后一次灌药后1h,心脏取血,组内混合,无菌分离血清,获得三种不同浓度的含药血清。空白对照组灌等量生理盐水,具体操作方法同前,获得正常兔血清。将经过复苏后的K562细胞放入37℃、5%CO2培养箱中培养,次日更换一次培养液。即加入l0ml含10%小牛血清的RPMI1640 (GBICO)培养液,每2~3天传代培养,更换细胞液。实验时选取对数生长期细胞。接种于培养板中,然后放入培养箱中,适应24h。然后将各组所得血清分别加入对数生长期的K562细胞中,观察K562细胞株的生长状况、K562细胞形态的影响、以及益气养阴解毒含药血清对K562细胞生长曲线的影响、对K562细胞MTT值的变化、用流式细胞仪检测K562细胞凋亡和细胞周期等指标。
结果:经益气养阴解毒方血清处理后的K562细胞,均符合细胞凋亡的特征,含药血清处理组的K562细胞形态发生明显变化,末处理组细胞无形态学变化;K562细胞生长曲线大剂量组、中剂量组与对照组比较有显著差异(P〈0.05),小剂量组与对照组比较无明显差异(P>0.05)。大剂量组与中剂量组比较亦无明显差异(P>0.05)。K562细胞的MTT值,大剂量组、中剂量组与对照组比较有显著差异(P〈0.05),小剂量组与对照组比较无明显差异(P>0.05)。大剂量组与中剂量组比较亦无明显差异(P>0.05)。
结论:益气养阴解毒方能够抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,使细胞受阻于S期而进入凋亡程序,其作用呈剂量一时间相关性。