副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPs)是引起猪Glasser’s病的病原体,HPs外膜蛋白(OMP)是副猪嗜血杆菌的毒力因子。本实验进行了副猪嗜血杆菌OMP的提取及其免疫原性的研究,为进一步研究副猪嗜血杆菌的OMP亚单位疫苗奠定了基础。1、HPs外膜蛋白的提取及浓度测定为研究副猪嗜血杆菌OMP的免疫原性,本试验选用副猪嗜血杆菌标准株血清1型、4型、5型、12型和13型,采用超声波破碎和十二烷基肌氨酸盐(SLS)提取副猪嗜血杆菌OMP,并用核酸蛋白仪测定了副猪嗜血杆菌OMP浓度,利用SDS-PAGE电泳检测,免疫印迹实验分析其免疫反应性。核酸蛋白仪检测副猪嗜血杆菌血清1型、4型、5型、12型和13型的外膜蛋白的浓度分别为58.3mg/ml、17.1mg/ml、34.7mg/ml、63mg/ml、28.7mg/ml。免疫印迹检测后发现HPs外膜蛋白具有良好的免疫反应性。2、HPs外膜蛋白免疫原性的研究制备油乳剂OMP免疫抗原和全菌灭活苗,对6周龄昆明鼠分别以OMP10ug/只、20ug/只、40ug/只、80ug/只的剂量皮下接种,全菌灭活苗则以0.2ml/只皮下接种,用ELISA方法检测小鼠抗体水平变化。结果表明:副猪嗜血杆菌全菌灭活苗和OMP免疫抗原对昆明鼠均有较强的免疫原性,首免后7天可检测到OMP阳性抗体。副猪嗜血杆菌血清1型OMP最佳免疫剂量为80ug时效果最好,攻毒保护率达到100%;全菌灭活苗攻毒保护率为70%。副猪嗜血杆菌血清4型OMP最佳免疫剂量为80ug时效果最好,攻毒保护率为80%;全菌灭活苗攻毒保护率为60%。血清5型OMP最佳免疫剂量为40ug、80ug时效果最好,攻毒保护率均为80%,表明血清5型的OMP在40ug时能给小鼠提供较好的保护;全菌灭活苗攻毒保护率为80%。血清12型OMP的最佳免疫剂量为40ug时效果最好,攻毒保护效率为90%;全菌灭活苗攻毒保护率为90%。血清13型OMP剂量为80ug时免疫效果最好,攻毒保护率为80%;全菌灭活苗攻毒保护率为80%。通过全菌灭活苗与OMP抗体水平检测和攻毒保护的相关测试,发现OMP具有较好的免疫原性,是副猪嗜血杆菌的重要保护性抗原。本试验结果将为副猪嗜血杆菌OMP快速诊断试剂盒的研制、亚单位疫苗的开发奠定良好的基础,并为该病的有效防制奠定了重要基础。