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随着机体的老化,心脏也同时发生和老化相关的病理变化,进而引起相关疾病的发生。目前,和老化相关的机制学说有数十种,而其中,以晚期糖基化终产物(AGEs)为基础的糖基化学说,备受关注。在心脏老化的过程中,心肌成纤维细胞和心肌细胞也逐渐老化,同时心肌胶原含量逐渐增加,在心肌间质及血管周围异常聚积,发生心肌纤维化。心肌纤维化不仅是冠心病、高血压和心力衰竭等疾病心室重构发生、发展的重要机制之一,更是心肌老化的重要特征。心肌的纤维化可引起心肌结构紊乱,心肌顺应性降低,僵硬度增加,并促使心律失常,顽固性心衰的发病率升高。因此,目前对心肌纤维化,尤其是AGEs诱导的老化过程中心肌纤维化相关机制的研究,显得格外重要。他汀类药物是临床上应用广泛的降脂药,具有强大的抗炎作用,已经有研究证实,他汀对心衰患者可能有益。匹伐他汀是新一代他汀类药物,是第一个全合成的HMG-CoA还原酶抑制剂,它对AGEs诱导的心肌纤维化的研究,目前还没有文献报道,其可能的作用机制,也还没有明确。本研究以培养的新生SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs)为研究对象,采用Western Blot和β-半乳糖苷酶染色等实验方法,观察了AGEs诱导的心肌成纤维细胞老化和纤维化的可能分子机制；同时观察HMG-CoA还原酶抑制剂匹伐他汀(Pit)对AGEs诱导的心肌成纤维细胞纤维化的影响及其潜在机制。为阐明心肌纤维化的发生机制,防治心肌纤维化提供实验依据。实验内容包括以下两个部分：第一部分晚期糖基化终产物对心肌成纤维细胞老化及纤维化的影响目的：探讨晚期糖基化终产物(AGEs)诱导心肌成纤维细胞老化及纤维化的相关机制。方法：用AGEs(200μg/ml)及抗-RAGE抗体(2μg/ml)、TGF-β/smad通路抑制剂(SB431542,10μM)干预乳鼠心肌成纤维细胞72h。观察老化相关指标β-半乳糖苷酶的活性及p16的表达；Western blot检测TGF-β, p-smad2/3, MMP-2的水平。结果：1.AGEs干预72小时后,AGEs组细胞老化指标p-半乳糖苷酶的活性及p16的表达水平较对照组明显升高(p<0.01),伴有TGF-β、p-smad2/3、MMP-2水平的显著增高,2.而给予抗-RAGE抗体或SB431542干预后,p-半乳糖苷酶的活性及p16的表达水平较AGEs组明显下降,同时TGF-β、p-smad2/3、MMP-2的水平也显著下降。结论：我们推测AGEs可与其受体RAGE作用诱导心肌成纤维细胞的老化,而TGF-β/smad信号通路引发的心肌纤维化可能参与了这一过程。第二部分匹伐他汀对AGEs诱导的心肌纤维化的保护作用目的：研究匹伐他汀对AGEs诱导的心肌成纤维细胞纤维化的保护作用,及其作用的分子机制。方法：用AGEs(200μg/ml)及匹伐他汀(600ng/ml)、抗-RAGE抗体(2μg/m1)干预乳鼠心肌成纤维细胞72h。Western blot检测促炎因子NFκB (p105/p50)及MMP-2, TGF-β, p-smad2/3的水平。结果：1.与对照组相比,AGEs组细胞NFκB (p105/p50)的表达明显上调,同时伴有MMP-2及TGF-β、p-smad2/3水平的显著增高；2.给予匹伐他汀或抗-RAGE抗体干预后,NFκB (p105/p50)表达量较AGEs组明显减少,同时MMP-2及TGF-β、p-smad2/3的水平也显著下降。结论：匹伐他汀可抑制AGEs的致心肌纤维化作用,此作用与其通过抑制AGEs-RAGE/NFκB通路,进而抑制TGF-β1, p-smad2/3, MM-2的表达有关。