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[目的]:建立焦磷酸测序检测HIV-1耐药劣势株平台,利用该方法探究HIV耐药劣势株在中国HIV/AIDS初治且疗效不佳患者中的流行数据及所起到的作用。[方法]:通过寡核苷酸标准品及人工合成序列对焦磷酸定量测序的线性、敏感性及稳定性进行测定。对HIV-1基因组RT区的若干针对NRTIs及NNRTIs的重要耐药突变位点设计包括PCR及焦磷酸测序引物,测序碱基分配顺序等测序方案。研究对象以我国“十一五”HIV/AIDS抗病毒治疗队列一(即初治患者)为基础,选取其中病毒学治疗失败患者,取起始治疗前血浆及部分病毒载量反弹后的血浆提取HIV-RNA,采用RT-PCR的方法对RT区基因进行扩增,使用焦磷酸测序方法对若干重要耐药位点进行定量测序,比对患者在基线至病毒载量反弹的临床数据信息(CD4+T淋巴细胞计数、HIV病毒载量、依从性及血药浓度、常规测序序列),进而探讨焦磷酸测序进行劣势耐药株检测对于HIV/AIDS患者临床治疗决策的意义和价值。[结果]:1.通过标准品、人工合成K103N野生及突变型序列成功标定本实验测序精度及线性,检测敏感度最低可达1%,检测线性经线性回归,R2=0.9978。2.设计针对NNRTI类及NRTI类药物耐药的8个位点(包括针对NNRTI类的K103Ns Y181CIV;针对NRTI类的M184VI、D67N、K70ER、L210W、T215YF、K219QE等)及相关的PCR引物及测序引物和核苷酸分配序列。使用含B型和AE型HIV病毒的血浆测试焦磷酸测序方案及上述8个位点,均获成功。3.对我国“十一五”HIV/AIDS抗病毒治疗队列一(即初治患者)患者的所有患者基线血浆标本进行常规耐药检测,选择常规方法未检出耐药,但出现病毒学失败的患者40例,对其基线血浆标本进行上述8个位点的焦磷酸测序。共检测出劣势耐药突变19个,以K103N,Y181C出现频率最高。4.对出现病毒载量反弹的20例患者反弹后耐药突变情况进行常规方法检测,其中5例焦磷酸检测出的突变位点与反弹后突变位点相符。对部分患者进行多位点、多时间点标本进行焦磷酸测序和常规测序,观察到劣势耐药株在药物压力下逐渐成为优势株、焦磷酸测序早于常规测序发现劣势耐药株等现象。[结论]:本研究在国内首次建立焦磷酸测序检测HIV-1劣势耐药株的平台,针对HIV-1的B及AE亚型的多个位点独立设计、完善测序方法。从HIV/AIDS初治队列中选择基线常规测序无耐药且病毒学治疗失败的患者进行基线及病毒载量反弹时间点的焦磷酸测序,提供在入组患者中劣势耐药株的流行数据。综合常规及焦磷酸测序结果和其他临床信息,提示焦磷酸测序能够发现患者血浆中存在的劣势耐药株,焦磷酸测序对于早期发现HIV-1劣势耐药株,及早使用敏感药物,减少治疗的病毒学失败有一定意义。