甘草多糖的提取、结构分析及活性研究

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甘草属多年生植物,具有良好的药用价值,是中药中应用最广泛的药用植物之一。甘草中的多糖成分具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。本论文以甘草多糖得率为指标,优化甘草多糖的提取条件,并对提取得到的甘草粗多糖进行分离纯化,研究纯化后甘草多糖的结构特征及体外抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性。以甘草为原料通过单因素正交实验考察提取温度、提取时间、提取次数和料液比对甘草多糖得率的影响,并进行优化。实验结果表明,水提取法最优提取条件:提取温度80℃,提取次数3次,提取时间2 h,料液比1:30(g·mL-1)。根据实验结果,对甘草多糖提取工艺的最佳条件进行了验证实验,甘草多糖得率为4.315±0.13%。通过热水提取,乙醇沉淀,除蛋白,除色素后冷冻干燥得到水溶性甘草粗多糖,其多糖含量为51.09%。甘草粗多糖经Sephadex G-200纯化得到甘草纯多糖,命名为GPS,其纯度为91.00%,得率为0.33%,分子量为1.96×103 kDa。通过比旋光度测定,单糖组成,红外谱图,高碘酸氧化和smith降解,核磁共振及甲基化等方法分析GPS的结构。结果表明,GPS的比旋光度为+20°,由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖组成,其摩尔比为1:4.048:3.174。GPS的糖苷键连接方式为以(1→4)链接的葡萄糖,(1→6)链接的半乳糖和(1→3,6)链接的葡萄糖为主链,以(1→3)链接的半乳糖,(1→5)链接的阿拉伯糖和T末端的葡萄糖为支链。刚果红实验结果显示GPS含有三股螺旋结构。扫描电镜结果显示,GPS表面呈平滑的片状和树枝状结构。通过检测对自由基的清除能力评价甘草多糖的体外抗氧化活性。研究结果表明,GPS对DPPH自由基、·OH自由基、O2-·自由基、ABTS的清除能力随着GPS浓度的升高而增强。GPS在浓度达到3 mg·mL-1时,对DPPH自由基、·OH自由基、O2-·自由基、ABTS 的清除能力分别为 50.75± 0.1 3%,52.32±0.13%,25.84±0.35%,44.57±0.15%,表明GPS具有一定的抗氧化作用,其中对O2-·自由基的清除效果不显著。α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究结果表明,GPS可以有效地抑制α-葡萄糖苷酶活性,且随着GPS浓度的增加,对α-葡萄糖苷酶的抑制能力增强。当GPS的浓度达到6 mg·mL-1时,其对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率达到64.77%。
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