【摘 要】
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目的:无精症(azoospermia)是受环境因素和遗传因素共同作用的一类复杂疾病。已知多个基因,包括锌指(zinc finger)蛋白基因与生精障碍有关。ZNF230基因是本室利用无精症患者与
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目的:无精症(azoospermia)是受环境因素和遗传因素共同作用的一类复杂疾病。已知多个基因,包括锌指(zinc finger)蛋白基因与生精障碍有关。ZNF230基因是本室利用无精症患者与正常对照的睾丸组织进行mRNA差异显示分离克隆的一个新的锌指蛋白基因,并推测其可能与无精症相关。斑马鱼是一种良好的脊椎类模式生物,已发现其与ZNF230同源的基因为rnf141。本研究采用高灵敏、高通量的突变筛查技术对99名无精症患者和115名正常对照的ZNF230基因进行了突变筛查,并分析了其与无精症的相关性,同时初步观察了rnf141基因在斑马鱼胚胎中的整体表达。 方法:用盐析法提取无精症患者和健康对照者外周血基因组DNA后,PCR扩增ZNF230基因全部6个外显子,然后用变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术对扩增片段进行了突变筛查,结果经测序认定分类后,用HWE、SPSS12.0软件对结果进行统计学分析。 从斑马鱼中提取总RNA,经RT-PCR扩增rnf141 cDNA大部分编码序列和部分3’端非翻译区,再经回收纯化后作重组克隆,测序确认阳性载体并线性化,以T7和SP6 RNA聚合酶双向分别制备出正义和反义地
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