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目的:观察聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)包裹的氧化铁磁性纳米颗粒polyMAG-1000体外介导TRAIL基因对乳腺癌的抑瘤效果,并观察其靶向TRAIL基因体内基因治疗乳腺癌的可行性及治疗效果,从而探讨PEI包裹的氧化铁磁性纳米颗粒polyMAG-1000用于基因转染载体的可行性,以期建立一种高效的靶向基因载体治疗系统。
方法:用扫描电镜观察了polyMAG-1000的表面特征,琼脂糖凝胶电泳观察了polyMAG-1000与编码绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒DNA结合的特性;体外基因转染后,荧光显微镜和流式细胞仪观察并检测乳腺癌细胞GFP的表达情况和转染效率。透射电镜和流式细胞仪检测了乳腺癌细胞经polyMAG-1000和脂质体转染目的基因TRAIL后的凋亡情况和凋亡率;建立荷乳腺癌裸鼠肿瘤模型后,经尾静脉和瘤内注射途径分别用polyMAG-1000和脂质体为载体携带TRAIL基因进行体内基因治疗实验,通过Tunel法检测了肿瘤细胞的凋亡情况,应用Westernblot检测了TRAIL蛋白的表达,并观察、比较治疗前后肿瘤体积的变化。
结果:1、polyMAG-1000粒经约100nm,琼脂糖凝胶电泳阻滞实验证实polyMAG-1000能在酸性、中性和碱性环境中稳定结合DNA;且在中性环境,polyMAG-1000和DAN比例为1:1(V:W)时结合效率最高;2、在体外基因转染实验中,当polyMAG-1000和DNA比例为1:1(V:W)时转染效率最高,且转染效率高于经脂质体转染的;3、加不加磁场转染效率也有显著差异,在polyMAG-1000与DNA比例为1:1时,当不加磁场时转染效率为10%左右,而加磁场后转染效率可增加几倍达50%左右;4、polyMAG-1000体外介导TRAIL基因治疗乳腺癌可导致肿瘤细胞的凋亡,凋亡率高于脂质体介导组;5、经三种途径体内基因的治疗均可见肿瘤组织TRAIL蛋白的表达并导致肿瘤细胞的凋亡,但TRAIL基因分别结合polyMAG-1000和脂质体经尾静脉注射两种途径的TRAIL蛋白表达量偏低,而经瘤内注射polyMAG-1000加磁场途径,TRAIL蛋白表达高于其他两种途径;6、肿瘤抑制实验发现三种途径治疗均使肿瘤生长受到抑制,但polyMAG-1000和脂质体经尾静脉注射两种途径治疗后的肿瘤抑制与对照组比较无显著性差异,经瘤内注射polyMAG-1000加磁场途径治疗后的肿瘤抑制与对照组比较有显著性差异。
结论:polyMAG-1000在体外基因转染中效率较高,极具应用前景,但应用于体内优势尚不明显,还须进一步研究、修饰、改进等。TRAIL基因治疗可特异性地引起肿瘤细胞的凋亡,作为肿瘤基因治疗的治疗基因具有一定价值。