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整合素αⅡbβ3介导的"outside-in(outside-in)”的信号转导被广泛的认为是扩大血小板激活反应的,然而越来越多的证据表明"outside-in"的信号转导在某些情况下可以抑制血小板的激活。为了弄明白整合素αⅡbβ3介导的"outside-in"信号通路对血小板激活的确切作用,我们通过血小板聚集仪,流式细胞仪,免疫印迹及免疫共沉淀等方法发现(1)整合素αⅡbβ3的抑制剂RUC2和RGD-peptide对低剂量CRP和TRAP引起的血小板ATP释放起促进作用。说明整合素αⅡbβ3介导的"outside-in"信号通路抑制血小板ATP释放。因为血小板释放对血小板聚集起扩大作用,所以整合素αⅡbβ3介导的"outside-in"信号通路具有负调控血小板聚集的作用。(2)在ADP为刺激剂的情况下,血小板聚集时Talin和Kindlin-3结合到整合素β3亚基上,当血小板解聚时,Talin和Kindlin-3从整合素p3上脱落下来。加入RGD-peptide抑制Talin和Kindlin-3从整合素αⅡbβ3上脱落。说明是整合素αⅡbβ3介导的"outside-in"信号通路参与调节Talin和Kindlin-3从整合素β3上脱落。(3)当刺激剂诱导整合素αⅡbβ3激活时,Akt发生磷酸化；而激活的整合素和配体纤维蛋白原结合,血小板发生聚集后,Akt发生去磷酸化,PI3K信号通路失活。加入整合素抑制剂RGD-peptide后,Akt的去磷酸化作用被抑制。说明Akt失活是由整合素αⅡbβ "outside-in"信号通路介导的。(4)我们加入SHIP-1抑制剂3AC后,Akt去磷酸化作用被抑制。说明SHIP-1参与调节Akt的去磷酸化作用。(5)SHIP-1的抑制剂3AC抑制血小板解聚,同时恢复ADP诱导的血小板ATP释放,而且能消除整合素介导的从外到内信号通路对血小板ATP释放的抑制效应。说明整合素介导的从外到内的信号通路通过激活SHIP-1,进而抑制血小板ATP的释放,所以SHIP-1是血小板聚集的负调控蛋白。这些结果暗示整合素αⅡbβ3介导的"outside-in"的信号转导可能启动了一个负反馈通路通过促进Talin和Kindlin-3从整合素上脱落使得整合素失活和激活SHIP-1导致P13K/Akt信号通路失活这两个方面抑制整合素的激活。