研究背景促进创面愈合和皮肤附件再生,以及预防瘢痕形成是目前创面治疗的难题。胚胎皮肤的“无瘢痕愈合”机制是目前解决这一难题的最主要的线索。早期胚胎皮肤创面愈合过程中缺少炎症反应,愈合后无明显瘢痕形成,皮肤及其附件可以完全再生[1-2]。迄今已经有大量的研究对胚胎皮肽发育和创面愈合的机制进行探索,并取得了一定的进展。但是受研究条件的限制,特别是缺少人胎儿皮肤的研究模型,该研究停滞不前。因此,我们尝试将早期人胎儿皮肤(human fetal skin, hFS)移植至裸鼠以构建胚胎皮肤体外研究模型,在此基础上,探索了表皮生长因子(epithelial growth factor, EGF)、角蛋白(keratin)5和19、基质金属蛋白酶(matix metalloproteinase, MMP)-2和MMP-7在人皮肽附件发育和Ⅱ°烫伤创面愈合过程中的表达规律。基质金属蛋白酶超家族(matix metalloproteinases, MMPs)在创面愈合、细胞迁移、胚胎皮肤及附件发育[3]、肉芽组织形成和组织重塑[5]中均发挥着重要的作用。其中,MMP-2和MMP-7与人胎儿皮肤及附件的形态发育密切相关[4]。方法(1)将不同胎龄的大鼠胚胎皮肤(rat embryonic skin, rES)埋植到裸鼠背部皮瓣下,在成活后3、7、14、21天(d)取标本行HE染色,观察成活后rES的发育情况。(2)获取人工流产的早期人胎儿皮肤(human fetal skin, hFS),移植至裸鼠背部皮瓣下。在移植成活后0、14、42、70、98d获取胚胎皮肤标本,_行HE染色观察人胎儿皮肤及附件发育的一般过程,并采用免疫组织化学染色法观察K5和K19以及MMP-2和MMP-7的表达规律。(3)在人胎儿皮肤移植成活后2周(W)制作早期hFSⅡ°烫伤动物模型,观察早期hFSⅡ°烫伤创面的愈合过程,并于烫伤后2h、1、3、7、13d获取组织标本,行HE染色观察创面愈合过程中,皮肤及皮肤附件的组织学变化,同期采用免疫组织化学染色法观察早期hFS Ⅱ°烫伤创面的愈合过程中EGF、MMP-2和MMP-7的表达规律。结果(1)在裸鼠背部皮瓣下埋植rES可顺利成活,并可经继续发育后生成完整的大鼠皮肤结构。(2)在裸鼠背部皮瓣下埋植hFS亦顺利成活,并可发育成完整的皮肤结构,其发育过程和子宫内发育过程基本一致。K5和K19在移植后的hFS中也能够表达,K5在移植后6周到10周在毛囊降突部呈过渡性表达；K19主要在新生的皮肤附件原基和毛囊突部表达,K19表达早于K5,且表达强度也较K5高。在hFS移植成活后发育过程中MMP-2表达阳性,面MMP-7未出现明显表达。(3)早期hFS Ⅱ°烫伤创面7天基本愈合,且愈合后肉眼及镜下观察均无瘢痕形成,镜下可皮肤附件原基再生。烫伤后早期可见创缘表皮的基底层细胞、毛囊根鞘的上皮细胞及创面上新生表皮细胞表达EGF；烫伤7天以后,随着创面愈合,创面及创缘表皮细胞EGF表达水平降低。MMP-7于烫伤后24小时在创面焦痂下表达阳性,呈带状分布；烫伤后3天,达到高峰：烫伤后9天,表达减弱;烫伤13天以后,MMP-7表达十分微弱。MMP-2在创面痂皮下的织织中表达阴性,仅在毛囊深层的生发顶端表达阳性,与对照组无显著差异。结论(1)大鼠胚胎皮肤裸鼠移植模型通过皮瓣法可以顺利建立,特别是皮肤附件发育早期的rES可移植成活,但是发育时间很短,不适合进胚胎皮肤Ⅱ°烫伤的研究观察。(2)采用同样的移植方法,可以建立早期hFS裸鼠移植模型,并保持了继续生长发育的能力和稳定性。因此,早期hFS裸鼠移植模型是符合胚胎皮肤发育和创面愈介及皮肤附件再生的研究所需的理想动物模型。(3)MMP-2参与了早期hFS裸鼠移植后的皮肤附件发育,而MMP-7与之无明显关联。(4)在裸鼠移植模型上早期hFS Ⅱ°烫伤创面能够达到无瘢痕愈合,其中,MMP-7在早期hFS创面愈合中发挥重要作用,而未发现MMP-2表达与其创面愈合存在明显关联性。