目的:构建SP110基因过表达的人单核巨噬细胞THP-1细胞模型,体外感染结核分枝杆菌H37Ra。初步探讨SP110基因在巨噬细胞抗Mtb感染中的作用机制。方法:(1)利用PCR法获取SP110基因序列,构建慢病毒载体LV5-SP110,转化大肠杆菌,双酶切及测序鉴定后,用RNAi-Mate将重组质粒和慢病毒辅助质粒系统(pGag/Pol、pRev、pVSV-G)包装成重组慢病毒颗粒,共转染293T细胞,获取慢病毒毒液并计算病毒滴度;(2)用已知滴度的慢病毒毒液转染THP-1细胞,以空质粒LV5-NC转染组作为对照,计算转染效率。采用RT-PCR法、Western blotting法鉴定SP110基因的表达;(3)MTT法检测SP110基因过表达对巨噬细胞的生长状态的影响;嘌呤霉素筛选稳定高表达SP110基因及稳定表达eGFP(绿色荧光)的THP-1细胞,分别作为实验组和对照组;用终浓度为200ng/mlPMA进行诱导分化后,体外感染H37Ra,感染24h、96h后细胞裂解物细菌培养菌落计数(CFU)的方法观察实验组及对照组细胞抗H37Ra的感染活性。结果:1.双酶切鉴定及DNA测序比对显示获得了与预期SP110基因序列完全一致的基因片段(1650bp),且成功构建了LV5-SP110和LV5-NC载体;经293T细胞包装后,成功获得病毒滴度为1×10~8TU/ml的重组慢病毒LV5-SP110和LV5-NC;2.成功转染了THP-1细胞,转染效率为50%,经RT-PCR法、Western blotting法鉴定,实验组细胞SP110基因在转录、翻译水平高表达;3.MTT法未发现LV5-SP110对THP-1巨噬细胞有抑制生长的作用;经嘌呤霉素筛选后获稳定高表达SP110基因的THP-1细胞及稳定表达eGFP(绿色荧光蛋白)的细胞;体外抗分枝杆菌H37Ra实验,显示SP110基因过表达的实验组巨噬细胞裂解物细菌培养菌落计数(CFU)低于对照组,差异具有统计学意义(p<0.05)。结论:成功构建了SP110基因过表达模型;SP110基因的过表达对巨噬细胞的增殖无抑制作用,体外抗菌实验表明SP110基因的过表达增强了巨噬细胞杀伤胞内吞噬的结核分枝杆菌H37Ra的能力。