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感音神经性耳聋(sensorineural hearing loss,SNHL)是目前最普遍的感觉器官功能障碍类型,可出现在任何年龄阶段的人群中,表现出不同程度的听力及言语功能障碍。全世界范围内大约有3.6亿人存在中度以上的听力障碍,其中大部分为感音神经性耳聋。环境和遗传因素均会导致内耳毛细胞及螺旋神经元的变性、损伤,造成永久性的听力障碍。由于成年哺乳动物内耳中毛细胞的再生能力十分有限,因此如果能够通过诱导其他器官来源的干细胞向内耳感觉上皮方向分化,再通过细胞移植的方法修复受损的内耳结构,进而可以达到改善听觉的目的。人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)不仅具有干细胞自我更新和多向分化的共性,还具有来源广泛,无伦理学争议,低免疫源性,以及一定的免疫调节功能等特性,可向成骨细胞,软骨细胞,神经干细胞,肝细胞等多种细胞类型分化,广泛应用于组织工程和细胞替代治疗。本研究拟在体外条件下探讨h UC-MSCs向内耳毛细胞样细胞分化的实验条件,为干细胞内耳移植治疗感音神经性耳聋提供新的种子细胞。目的在体外探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)定向诱导分化为毛细胞样细胞的可行性和方法。方法1、使用实验室的现有方法,原代分离培养、获得h UC-MSCs;取培养至3-5代的h UC-MSCs在添加DMEM/F12+N2+B27+EGF+b FGF琼脂糖包被的抗贴壁培养瓶中培养3-5天,诱导细胞向神经干细胞方向分化,用免疫荧光检测神经干细胞标记物Nestin的表达情况。2、将诱导后的神经干细胞转移到明胶(gelatin)特殊包被的培养瓶中,在DMEM/F12+N2+B27+EGF+ATRA培养基中培养2-4周,进一步向内耳毛细胞样细胞诱导分化,免疫荧光及q RT-PCR检测毛细胞标记物Math1、Myosin VIIa,Brn3c的表达情况。结果1、体外h UC-MSCs诱导后形成神经球样结构,并表达神经干细胞标记物Nestin。2、经诱导分化后的神经干细胞在内耳感觉上皮诱导培养基中经2-4周的分化后表达Math1、Myosin VIIa,Brn3c等毛细胞标记物,向内耳毛细胞样细胞分化。结论人脐带来源间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)能够在体外跨胚层转分化为神经干细胞,并可进一步定向诱导分化为内耳毛细胞样细胞,可能作为理想的种子细胞用于感音神经性耳聋的内耳移植治疗。