羊栖菜多糖的化学修饰及生物活性研究

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羊栖菜是褐藻中的一种,广泛分布于中国、韩国、日本,作为治疗剂使用已有千年历史。从羊栖菜中提取的多糖具有多种功能,如抗肿瘤、抗弧菌病、增强免疫力和抗高血脂等。国内外有关研究表明,多糖的生物活性与多糖的分子量、空间结构、以及取代基种类、数目和位置有关。羊栖菜多糖已阐明具有的抗氧化、抗菌、抑制酪氨酸活性均较低,难以满足需求,且羊栖菜多糖化学修饰大多集中在硫化和硒化。为进一步提高多糖的抗氧化活性、酪氨酸酶抑制活性和抑菌活性,本文将羊栖菜多糖先降解,再制备其羧甲基化和异羟肟酸化衍生物,并研究他们的抗氧化活性、酪氨酸酶抑制作用和抑菌活性。主要研究结果如下:1.用热水浸提法从羊栖菜中提取粗多糖(PSF),并用H2O2-Vc联合法对其进行降解得到降解多糖,对降解条件进行响应面优化,结果显示最佳工艺条件为:过氧化氢(H2O2)和维生素C(Vc)为17.26 mM,降解温度51℃,降解时间1.6h。2.采用氯乙酸对在优化条件下得到的降解多糖(DPSF)进行羧甲基化修饰,得到的羧甲基衍生物(CDPSF),在1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺(EDC)存在下与羟胺偶联,得到多糖的异羟肟酸衍生物(HCDPSF)。对降解前后多糖的化学组分分析,结果表明各组分相差不大。HPGPC测得其降解前后的分子量分别为987、407 kDa。GC-MS分析结果表明PSF、DPSF和CDPSF的单糖组成均主要为岩藻糖和半乳糖,以及少量的甘露糖、木糖和葡萄糖。IR、1H NMR和13C NMR结果表明羧甲基化和异羟肟化修饰成功。3.通过 PSF、DPSF、CDPSF、HCDPSF-2 对自由基(DPPH、·OH、O2-·)清除活性及铁还原能力的研究,对样品抗氧化活性进行评价。结果表明,与PSF相比,DPSF的抗氧化活性有显著的提高,而衍生化多糖CDPSF、HCDPSF-2的抗氧化活性则比DPSF得到进一步的改善。同时,我们还测定了 PSF和DPSF对酪氨酸酶的抑制作用,结果表明:PSF和DPSF对酪氨酸酶的均有抑制作用且DPSF抑制作用高于PSF,并且得出DPSF是酪氨酸酶的可逆混合型抑制剂的结论。4.以枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、埃希氏大肠杆菌、绿脓杆菌及沙门氏菌作为供试菌种,通过样品对受试菌种的抑菌圈和最低抑菌浓度(MIC)的测定,进行体外抗菌活性研究,结果表明:CDPSF和HCDPSF对五种菌有明显的抑制作用,PSF、DPSF没有抑菌活性。
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