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原发性肝癌(primary liver cancer,PLC)是消化系统中常见的恶性肿瘤之一,其中肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)约占PLC的70-85%以上。据文献报道,HCC是世界上常见的五大实体恶性肿瘤之一,在肿瘤相关致死原因中居第二位,仅次于肺癌,已成为全世界性公共健康问题。HCC患者行根治性手术切除(包括激进性切除)后,在其五年生存当中,转移和/或复发率达到了60-70%。如此高的临床转移和复发率其根本原因在于HCC对于传统治疗方法(化学药物治疗和放射介入治疗)具有很强的耐受性。HCC是一种免疫原性肿瘤,这提示我们免疫治疗技术可作为治疗HCC的一种有效选择途径。目前临床实践中,已有将细胞因子、疫苗和活化的免疫细胞输注作为定向免疫治疗HCC的治疗方法。随着近些年来研究深入发现,肿瘤局灶微环境中的免疫抑制性网络是限制肿瘤免疫治疗疗效的主要因素之一。肿瘤细胞是肿瘤局灶微环境中的重要构成分子,其主要通过产生多种抑制性细胞因子(如TGF-β和IL-10)和/或诱导调节性细胞产生(Tregs和Bregs)等途径,参与恶性肿瘤内部免疫抑制网络的形成。细胞因子在信号传导中担当着重要角色,是体内重要的生物信息分子。它对调控肿瘤免疫应答、维持机体内环境免疫稳态等生物学事件有着重要影响。白细胞介素-35(interleukins-35,IL-35)是近些年来发现并命名的新型因子,其归属于IL-12家族细胞因子。IL-35在结构上与该家族成员(IL-12、IL-23和IL-27)具有相似性。但其在细胞来源和生物学功能等方面与同家族分子具有显著的差异性。众多文献报道,IL-35在炎症、器官移植、自身免疫及肿瘤等免疫方面均发挥着重要作用。IL-35是重要的负向调控因子,在调节性T细胞(Tregs)免疫功能的发挥中起着重要作用。Maryam等采用qRT-PCR方法,从基因水平检测了40例乳腺癌患者和正常女性外周静脉血中IL-35两亚基(p35和Ebi3)和Foxp3信使RNA(mRNA)的表达水平。结果显示,乳腺癌患者外周静脉血中p35、Ebi3和Foxp3 mRNA水平明显上调较正常女性。提示IL-35在乳腺癌患者中表达水平升高,同时也可能对Tregs功能的发挥是必要的。目前研究表明,IL-35在多种恶性肿瘤(如食管癌、前列腺癌等)患者的肿瘤标本和外周血中呈异常表达,但其在HCC患者中的表达情况及其对肝癌细胞的作用和机制罕见报道。因此,本研究旨在探讨IL-35对HCC的作用及其对肝细胞癌细胞系HepG2功能的影响及初步机制。本实验通过收集解放军第三0九医院肝胆外科确诊的55例HCC患者外周静脉血标本;同时留取16例年龄和性别分布无统计学差异的健康体检者外周静脉血标本为正常对照组。使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测收集外周静脉血中IL-35蛋白含量的表达情况。进一步运用外源性IL-35体外处理肝癌细胞系HepG2细胞。观察IL-35对HepG2细胞增殖活性、侵袭和迁移生物学功能的影响及其可能发生机制。结果表明:1、HCC患者外周静脉血上清中IL-35蛋白含量[(118.45±28.66)ng/L]显著高于健康体检者外周静脉血上清[(39.56±11.15)ng/L],差异具有显著统计学意义(P<0.05)。2、外源性IL-35处理HepG2细胞组较对照组增殖活性、侵袭和迁移能力均具有显著提高(P<0.05)。3、IL-35对HepG2细胞的凋亡能力无明显影响(P>0.05)。4、流式细胞术(FCM)检测发现,IL-35处理组(50μg/L)HepG2细胞表面受体gp130和IL-12Rβ2平均免疫荧光强度[(947.09±40.22)和(12.30±1.48)]相对阴性对照组[(785.89±89.68)和(9.07±2.01)]具有明显的差异性(P<0.05)。通过以上实验得出以下结论:1、HCC患者外周静脉血上清中IL-35蛋白含量相较正常体检者表达情况明显上调,提示IL-35可能对HCC的发生发展具有一定的影响。2、IL-35具有促进HCC细胞增殖活性、迁移和侵袭的生物学特性。3、IL-35对HCC细胞凋亡情况无明显影响。4、IL-35可以促进肝癌细胞表面受体(gp130和IL-12Rβ2)的表达,其生物学功能的发挥可能是通过gp130和IL-12Rβ2实现的。