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目的:1、研究水飞蓟宾对胃癌SGC7901细胞体外增殖、凋亡及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。2、观察水飞蓟宾对胃癌SGC7901细胞侵袭和迁移能力的影响,进一步探讨其作用机制。3、探讨p38MAPK信号通路在水飞蓟宾降低胃癌SGC7901细胞侵袭与迁移能力中的作用。方法:1、采用CCK-8法检测水飞蓟宾对胃癌SGC7901细胞体外增殖的影响。2、应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。3、分别使用Western blot和实时定量PCR方法检测CDK1、Cyclin B1、STAT3、p-STAT3、Mcl-1、Bcl-xL、Survivin、Caspase 3和Caspase 9蛋白表达及基因mRNA水平。4、采用划痕试验及Transwell小室体外侵袭及迁移实验观察水飞蓟宾对胃癌SGC7901细胞体外侵袭及迁移力的影响。5、应用Western blot和实时定量PCR方法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达和mRNA水平的变化。6、Western blot方法检测水飞蓟宾作用于胃癌SGC7901细胞后p-38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达变化。7、p-38MAPK信号通路抑制剂(SB203580)单独或联合水飞蓟宾处理胃癌SGC7901细胞,应用Transwell小室体外细胞侵袭与迁移实验观察处理后胃癌SGC7901细胞侵袭与迁移能力的变化。8、Western blot方法检测SB203580单独或联合水飞蓟宾处理胃癌SGC7901细胞MMP-2和MMP-9蛋白的表达变化。结果:1、与对照组相比,随着水飞蓟宾药物浓度增加及药物作用时间的延长,水飞蓟宾对胃癌SGC7901细胞体外增殖的抑制作用也逐渐增强,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。2、水飞蓟宾作用下胃癌SGC7901细胞G2/M期比例增多,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);随着水飞蓟宾药物浓度的增加及药物作用时间的延长,胃癌SGC7901细胞凋亡率增加,明显高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。3、水飞蓟宾作用后胃癌SGC7901细胞Cyclin B1、CDK1蛋白表达和mRNA水平与对照组相比较均明显下降,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比较,水飞蓟宾作用后胃癌SGC7901细胞STAT3蛋白表达和mRNA水平无明显变化,而p-STAT3蛋白的表达较对照组降低(P<0.05);Mcl-1、Bcl-xL和Survivin蛋白表达和mRNA水平均下降,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);Caspase 3和Caspase 9蛋白表达和mRNA水平较对照组增高,差异有统计学意义(P<0.01)。4、细胞划痕实验结果显示随着水飞蓟宾浓度的增加,胃癌SGC7901细胞的体外迁移能力逐渐下降;Transwell小室检测水飞蓟宾对胃癌SGC7901细胞体外迁移能力结果显示,水飞蓟宾处理胃癌SGC7901细胞48h后穿膜细胞数较对照组的穿膜细胞数明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell小室检测水飞蓟宾对胃癌SGC7901细胞体外侵袭能力结果显示,水飞蓟宾处理胃癌SGC7901细胞48h后穿膜细胞数较对照组的穿膜细胞数明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。5、Western blot分析显示水飞蓟宾处理组胃癌SGC7901细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达显著降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);实时定量PCR结果显示100、200μmol/L水飞蓟宾处理组MMP-2、MMP-9的mRNA水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。6、Western blot结果显示:与对照组相比,水飞蓟宾处理后p-38MAPK蛋白表达无明显变化(P>0.05),而p-p38MAPK蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05)。7、Transwell小室体外侵袭能力实验显示:水飞蓟宾组、SB203580处理组穿膜细胞数明显少于未处理组,差异有统计学意义(P<0.01),联合组穿膜细胞数明显少于水飞蓟宾组,差异有统计学意义(P<0.01);Transwell小室体外迁移能力实验显示水飞蓟宾组、SB203580处理组穿膜细胞数少于未处理组,差异有统计学意义(P<0.01),联合组穿膜细胞数少于水飞蓟宾组,差异有统计学意义(P<0.01)。8、Western blot结果显示:水飞蓟宾组、SB203580组胃癌SGC7901细胞MMP-2、MMP-9蛋白的表达较对照组明显下降,差异有统计学意义(P<0.01)。与水飞蓟宾组相比较,联合组胃癌SGC7901细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达量显著下降,两组之间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1、水飞蓟宾能够抑制胃癌SGC7901细胞体外增殖;水飞蓟宾能够诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,使胃癌SGC7901细胞周期停滞于G2/M期。2、水飞蓟宾使胃癌SGC7901细胞CDK1、Cyclin B1表达下降,导致细胞周期停滞于G2/M期;水飞蓟宾下调胃癌SGC7901细胞p-STAT3、Mcl-1、Bcl-xL、Survivin的表达、上调Caspase 3和Caspase 9的表达,诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的发生。3、水飞蓟宾可能通过STAT3通路发挥诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及阻滞细胞周期的作用。4、水飞蓟宾可降低胃癌SGC7901细胞的体外侵袭力与迁移力。5、水飞蓟宾使胃癌SGC7901细胞MMP-2和MMP-9表达降低,可能通过抑制MMP-2和MMP-9的表达来降低胃癌SGC7901细胞的侵袭与迁移力。6、水飞蓟宾能够抑制胃癌SGC7901细胞p38MAPK蛋白的活化,可能通过p38MAPK信号通路下调MMP-2、MMP-9的表达,降低胃癌SGC7901细胞侵袭力与迁移力。