脾胃学说是中医脏象理论的核心。当前脾本质研究中脾虚证已取得令人瞩目的成绩。脾胃湿热证是脾胃实证研究的突破口，以慢性浅表性胃炎为切入点研究脾胃湿热证本质十分重要。现有研究已证实，脾胃湿热证与炎症感染有关，但机理仍未明。可能与胃黏膜保护因子、攻击因子间平衡失调有关，这与中医理论“正气存内，邪不可干”相符合。幽门螺杆菌(HP)与慢性胃炎脾胃湿热证炎症机制的研究已很多，但幽门螺杆菌阴性胃炎脾胃湿热证机制报道尚少。我们设想胃黏膜保护因子三叶因子1(Trefoil Factor 1，TFF1)和攻击因子细胞间粘附分子-1(Intercellular Adhension Molecule-1，ICAM-1)在幽门螺杆菌阴性胃炎脾胃湿热证及其亚型中可能与湿热病邪相合为病、正邪交争状态等病机有关。一、文献研究TFF1是由胃黏液细胞分泌的小分子多肽，可形成黏液层，具有胃肠黏膜保护与损伤修复，促黏膜重建，抑制增殖和抗凋亡的功能，是胃黏膜保护因子之一，属中医“正气”范畴。脾胃湿热证胃肠粘膜局部致炎因子增强，而保护因子减弱是其发病的主要机制，这与中医“正气存内，邪不可干”不谋而合。TFF1在脾胃湿热证中可能与其“正气抗邪”的防御作用机制有关。ICAM-1是细胞膜表面的糖蛋白，属黏附分子免疫球蛋白超家族成员，具有参与炎症反应、细胞与组织的分化和发育、免疫应答反应、参与淋巴细胞归巢和再循环及肿瘤扩散转移等功能。ICAM-1作为慢性胃炎局部炎症的攻击性因子之一，具有延迟表达和持续长久的特点，恰好与湿邪的致病特点(湿性粘滞)相合。慢性胃炎脾胃湿热证中湿、热邪气相合为病，缠绵难解，ICAM-1可能参与脾胃湿热证湿邪致病的分子机制之一。荧光定量PCR技术因综合运用了荧光能量传递技术、传统聚合酶链反应技术与数学原理的巧妙结合，故具有高精确度、高特异性、操作快速、安全等特点。用于TFF1、ICAM-1的基因检测体现论文的创新性。二、临床实验研究目的：在幽门螺杆菌阴性慢性胃炎脾胃湿热证、脾虚证、脾胃湿热证各亚型(热重于湿、湿重于热、湿热并重)患者中检测TFF1、ICAM-1的基因和蛋白表达。1．探讨其在脾胃虚实不同证型及脾胃湿热证各亚型中的病机作用；2．研究了FF1、ICAM-1表达分别与患者胃黏膜炎症程度、临床症状、体征之间的关系；3．探讨慢性胃炎不同证型及脾胃湿热证各亚型中TFF1与ICAM-1之间的相互关系及其在不同病机状态下的分子生物学机制。方法：所有病例均源于广州中医药大学第一附属医院门诊和住院部；正常人作对照，均为广州中医药大学本科志愿学生。所有受试对象均已签知情同意书。实验一、二中共47例慢性胃炎患者，被分为3组，其中脾胃湿热证组27例，脾虚组10例，正常人组10例。实验三、四中共37例，其中27例脾胃湿热证患者被分为3组，热重于湿组、湿重于热组、湿热并重组各9例。所有受试对象均经临床检测并记录临床症状、体征等，均查胃镜，于胃窦取标本查快速尿素酶试验(RUT)及美蓝染色以检测幽门螺杆菌。实验一、慢性浅表性胃炎不同证型中TFF1、ICAM-1的基因表达所有47例受试对象于胃镜下观察胃黏膜炎症情况，取胃窦黏膜三块。2．一块测RUT，3．另一块美蓝染色查HP及常规病理学检查胃黏膜炎症程度，4．第三块用荧光定量PCR测TFF1、ICAM-1在胃组织中mRNA表达量。实验二、慢性浅表性胃炎不同证型中TFF1、ICAM1的蛋白表达步骤1-3同实验一。4．第三块用免疫组化法测TFF1、ICAM-1在胃组织中的蛋白表达。实验三、脾胃湿热证各亚型中TFF1、ICAM-1的基因表达1．所有37例受试对象于胃镜下观察胃黏膜炎症情况，取胃窦黏膜三块。2．一块测RUT，3．另一块美蓝染色查HP及常规病理学检查胃黏膜炎症程度，4．第三块用荧光定量PCR测TFF1、ICAM-1在胃组织中mRNA表达量。实验四、脾胃湿热证各亚型中TFF1、ICAM1的蛋白表达步骤1-3同实验三。4．第三块用免疫组化法测TFF1、ICAM-1在胃组织中的蛋白表达。结果：所有受试对象的RUT检测及美蓝染色检测HP的结果均为阴性。实验一、胃镜下慢性胃炎胃黏膜充血水肿、黏液附着；脾胃湿热证组充血水肿与血管显露均明显，黏液多而呈浓绿色；脾虚组充血、水肿轻于脾胃湿热证组，黏液稍多而呈隐白色。病理检查均见炎细胞和淋巴细胞浸润，炎症程度脾胃湿热证组明显重于正常人组(P＜0.01)，脾虚证组重于正常人组(P＜0.05)，但两证型间炎症程度无明显差别(P＞0.05)。脾胃湿热证、脾虚证TFF1基因表达：脾胃湿热证＞正常人＞＞脾虚证；与舌质呈负相关(r=0.554，P＜0.01)，与口渴、口干呈正相关。脾胃湿热证、脾虚证ICAM-1基因表达：脾胃湿热证＞＞脾虚证≈正常人；与炎症程度呈正相关(r=0.521，P＜0.01)；与舌质、食欲呈负相关，与口渴、口干、肢体困重呈正相关。慢性胃炎脾胃湿热证、脾虚证中TFF1与工CAM-1基因表达的关系：LOG(TFF1)与LOG(ICAM-1)呈正相关(r=0.453，P＜0.01)；LOG(TFF1)／LOG(ICAM-1)比值为正常人稍大于脾胃湿热证(P＞0.05)，脾胃湿热证＞脾虚证(P＜0.05)。实验二、脾胃湿热证、脾虚证中TFF1蛋白表达：主要在胃黏膜腺体细胞胞浆中表达，阳性染色呈棕黄色，越接近腔面的细胞阳性染色越深。正常人组阳性染色强度为浅棕色，范围多限于黏膜浅层。脾虚证组阳性染色呈浅棕色，阳性染色范围小，或阴性。脾胃湿热证组阳性染色为深棕黄色，阳性染色范围大。TFF1阳性染色程度及范围为脾胃湿热证＞脾虚证＞正常人。TFF1蛋白表达与舌质呈负相关(r=-0.394，P＜0.05)，与大便性状呈正相关。脾胃湿热证、脾虚证ICAM-1蛋白表达：ICAM-1阳性染色呈黄色，主要在细胞膜，也可在细胞质，多分布于细胞之间。正常人胃黏膜上皮无ICAM1蛋白阳性染色颗粒。脾虚证组ICAm1表达呈浅黄色，范围较浅层，为弱阳性表达。脾胃湿热证组ICAM1为黄色阳性染色颗粒，阳性染色程度及范围均最强。ICAM1阳性染色程度及范围：脾胃湿热证＞脾虚证≈正常人。ICAM1蛋白表达与炎症程度呈正相关(r=0.528，P＜0.01)；与舌质呈负相关(r=-0.556，P(0.01)；与口渴、口干、肢体困重呈正相关。慢性胃炎脾胃湿热证、脾虚证中TFF1与ICAM-1蛋白表达的关系：在蛋白表达指标间呈正相关(r=0.404，P＜0.01)。实验三、胃镜下各亚型组均见黏膜充血水肿明显，多可伴糜烂或出血点，黏液湖量增多。各亚型组间的胃镜下表现无明显差别。病理结果示各亚型炎症程度均介于中度-重度之间，湿热并重组＞热重于湿组＞湿重于热组，但组间无明显差异。脾胃湿热证各亚型组TFF1基因表达：热重于湿组≈湿重于热组＞＞湿热并重组；与返酸、呃逆呈负相关。脾胃湿热证各亚型组ICAM-1基因表达：热重于湿组≈湿热并重组＞＞湿重于热组；与舌质呈负相关(r=-0.551，P＜0.01)。脾胃湿热证各亚型中TFF1与ICAM-1基因表达的关系：LOG(TFF1)／LOG(ICAm-1)比值为湿重于热组＞热重于湿组＞湿热并重组(组间P值均＜0.05)，其中湿重于热组稍大于正常人组，正常人组稍大于热重于湿组(均为P＞0.05)。实验四、脾胃湿热证各亚型组TFF1蛋白表达：均为深棕黄色，阳性染色范围大，表达强度介于++→+++++之间，热重于湿组稍＞湿热并重组稍＞湿重于热组，但组间无明显差别；与炎症程度呈负相关(r=-0.556，P＜0.01)：与舌质呈负相关(r=-0.420，P＜0.05)。脾胃湿热证各亚型组ICAM-1蛋白表达：均为黄色，阳性染色范围大，表达强度主要介于++→+++之间，湿热并重稍＞热重于湿稍＞湿重于热，但组间均无明显差异。三、结论1．脾胃湿热证时，胃黏膜TFF1、ICAM-1均高表达，LOG(TFF1)／LOG(ICAM-1)比值高，提示机体炎症与保护都处于强反应的亢盛状态。2．脾胃湿热证各亚组TFF1蛋白表达与炎症程度呈负相关，提示TFF1在脾胃湿热证中可能是胃黏膜局部“正气抗邪”的分子生物学基础之一。3．脾胃湿热证胃黏膜ICAM-1基因、蛋白表达均与炎症程度呈正相关，提示ICAM-1可能参与脾胃湿热证湿邪致病的分子机制。4．TFF1、ICAM-1的表达及其比值随脾胃湿热证亚型组的不同而有差异。提示占主导地位的外邪数量可能影响TFF1的表达，热邪的比分可能影响ICAM1的表达，湿热合邪可致LOG(TFF1)／LOG(ICAM-1)比值明显降低。5．慢性胃炎患者舌质分别与了FF1、ICAM-1基因、蛋白表达均呈负相关，提示TFF1、ICAM-1表达变化可能是中医脾胃虚实证侯的分子生物学基础之一。6．脾虚证时，TFF1、ICAM-1均低表达，LOG(TFF1)／LOG(ICAM-1)比值低，提示机体正气不足，对炎症反应不强烈。7．脾胃湿热证、脾虚证中TFF1、ICAM-1基因表达指标间呈正相关，提示TFF1、ICAM-1可能参与脾胃湿热证、脾虚证中邪正盛衰的病理机制。8．荧光定量PCR技术具有高精确度、高特异性等优点，用于检测TFF1、ICAM-1的基因表达体现本论文的创新性。