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焦虑症(Anxiety Disorders,AD)是一种慢性、可致残性的疾病,以患病率、复发率高为特征,可对个人、家庭乃至整个社会造成极大危害。截止至2010年,焦虑症已成为第二大损伤人类寿命及身体健康的精神类疾病,仅次于抑郁症。与抑郁症等大多数精神类疾病相同,焦虑症的发病原因与机制较为复杂,学术界至今尚无定论。尽管近年来对焦虑症的生理病理研究取得了一定成果,临床上仍缺乏疗效高、成本低、副作用小的治疗方法。中医疗法(尤其是针刺疗法)作为西医药物治疗焦虑症的辅助疗法,正受到越来越多关注。大量文献及实验研究证明针刺可有效治疗焦虑症,减轻病人痛苦,但其具体的起效机制仍然存在探讨空间。目的本实验聚焦免疫炎症反应在焦虑症发病中的作用,通过观察针刺对小鼠海马及内侧前额叶皮层(mPFC)中核转录因子-κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,探究针刺治疗焦虑症的可能机制。方法将24只C57BL/6雄性小鼠以随机数字表法分为四组,分别为空白组、模型组、疏肝组和调神组,每组6只。正式实验开始前小鼠适应性饲养一周,此期间由实验者于每日固定时间抚摸小鼠,持续约3min,使其适应与实验者接触。除空白组外,其他三组小鼠每天放入自制装置行慢性束缚应激(Chronic restraint stress,CRS),2h/d,共7d,应激时注意保持小鼠呼吸顺畅。疏肝组每日针刺双侧“四关”穴,留针10min,干预治疗结束1h后行束缚应激,共7d;调神组于每日针刺“百会”、“印堂”穴,留针10min,干预治疗结束1h后行束缚应激,共7d。空白组小鼠每日接受实验者轻抚3min,再于应激诸组相同实验环境中放置2h。7d应激结束后第一天进行黑白箱测试,次日进行高架十字迷宫测试,测试结束后立即取材。行为学测试用以评价各组小鼠焦虑水平,免疫印迹(Western blot,WB)法检测小鼠海马、内侧前额叶皮层中NF-κB及TNF-α蛋白的表达。结果1针刺对CRS小鼠焦虑样行为的影响1.1黑白箱测试:与空白组相比,模型组小鼠在白箱中滞留总时间明显减少(P<0.01),在两箱中穿梭次数有减少趋势,差异无统计学意义;与模型组相比,疏肝组及调神组小鼠在白箱中滞留总时间显著延长(均P<0.01),穿梭次数增加(均P<0.05),两针刺治疗组组间差异无统计学意义。1.2高架十字迷宫测试:与空白组相比,模型组小鼠进入开放臂次数的百分比(0E%)显著降低(P<0.01);与模型组相比,疏肝组OE%有下降趋势,调神组OE%明显减少(P<0.05)。2.针刺对小鼠海马、mPFC中NF-κ B及TNF-α表达的影响2.1海马中:与空白组相比,模型组小鼠NF-κB蛋白的表达量升高(P<0.05),TNF-α蛋白表达量有升高趋势,差异无统计学意义;与模型组相比,疏肝组及调神组小鼠NF-κ B及TNF-α蛋白表达量均出现减少趋势,差异无统计学意义。2.2 mPFC中:与空白组相比,模型组小鼠NF-κB及TNF-α蛋白均呈现表达升高趋势;与模型组相比,疏肝组及调神组小鼠NF-κ B及TNF-α蛋白的表达量均显示下降趋势,差异无统计学意义。结论1慢性束缚应激法可以引起小鼠焦虑样行为,黑白箱测试及高架十字迷宫测试结果趋势一致;分子学水平表现为小鼠海马、mPFC中NF-κB及TNF-α蛋白表达量升高,其中海马中NF-κ B表达量升高最为明显,提示免疫炎症反应被激活。2针刺“四关”穴和针刺“百会”穴、“印堂”穴均能一定程度上改善小鼠的焦虑样行为,下调小鼠海马、mPFC中NF-κB及TNF-α蛋白的表达,但这种趋势并无明显统计学差异。3两组腧穴在改善焦虑样行为和下调NF-κB、TNF-α表达的作用上无明显差异。综上所述,针刺“四关”穴和针刺“百会”穴、“印堂”穴均可改善束缚应激引起的焦虑样行为。针刺可能是通过调控机体免疫炎症反应,抑制海马及mPFC中NF-κB的激活,下调TNF-α表达发挥抗焦虑的作用的。