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雌二醇(Estradiol,E2)在卵巢中具有促进颗粒细胞增殖及调节卵母细胞分化等作用,是卵泡生长发育和颗粒细胞存活的重要因子。卵泡内雌激素的产生能力与代谢水平对于卵泡健康非常重要,充足的雌激素对于卵泡的发育和排卵是必不可少的。Cyp1b1是Cytochrome P4501亚家族的成员之一,在机体组织内主要负责卤代及多环芳烃的代谢。在小鼠卵泡内,Cyp1b1能将雌二醇代谢成4-羟基雌二醇,降低卵泡内雌激素的含量,且代谢产物4-羟基雌二醇能引起卵泡颗粒细胞的凋亡。因此,研究Cyp1b1的调控表达机制对解释卵泡发育障碍的分子机理具有重要意义。调控Cyp1b1表达的转录因子有很多,在实验室前期研究基础上,本文挑选STAT1作为Cyp1b1的候选转录因子,研究在小鼠颗粒细胞中其调控Cyp1b1表达的机制。相关研究内容与结论如下: (1)构建小鼠STAT1过表达载体并将其转染到小鼠颗粒细胞中,观察其本身的表达情况及其对Cyp1b1表达的影响。结果表明:STAT1过表达载体能在小鼠颗粒细胞内高效表达,且能促进Cyp1b1 mRNA转录及蛋白的表达。说明STAT1确实调控Cyp1b1的表达。 (2)网站预测(http://www.cbrc.jp/research/db/ TFSEARCH.html)发现,STAT1在Cyp1b1的启动子区域有两个绑定位点(binding site,BS),分别位于转录起始位点的上游-908到-900区域(BS1)和下游的+486到+494区域(BS2)。构建野生型及绑定位点突变型Cyp1b1启动子区域(-1208到+818)荧光素酶报告质粒,将这些载体与STAT1过表达载体共同转染到3T3细胞内,比较不同转染组荧光素酶活性发现,与野生型相比,绑定位点突变后能显著降低相关载体的荧光素酶活性。说明网站预测的结合位点是正确的,STAT1直接与Cyp1b1启动子区域结合调控Cyp1b1的表达。 (3)只将绑定位点突变型Cypb1启动子区域荧光素酶报告质粒与STAT1过表达载体共同转染到3T3细胞系,比较上、下游绑定位点在STAT1调控Cyp1b1表达的重要性发现,相比突变上游绑定位点,突变下游绑定位点后相关载体的荧光素酶活性下降的更低,但在统计学上两者并无显著差异。说明在STAT1调控Cyp1b1表达过程中上、下游绑定位点可能发挥着同等重要的作用。