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目的:探讨沙苑子黄酮(FAC)及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对CCl4致小鼠肝纤维化的干预作用及其机制研究。
方法:昆明种小鼠随机分成正常对照组、模型组、FAC-1低剂量组、FAC-2中剂量组、FAC-3高剂量组、EGCG-1低剂量组、EGCG-2中剂量组、EGCG-3高剂量组和阳性对照药秋水仙碱组,共9组。除模型组20只外,其余每组均12只。小鼠腹腔注射50%CCl4橄榄油溶液(1 ml/kg)诱导肝纤维化模型,正常对照组给予等量生理盐水腹腔注射,每周2次,持续6周。自造模当日起,给药组每天分别灌服FAC、EGCG和秋水仙碱(0.1 ml/10g)。实验结束后,称小鼠体重及肝重计算肝系数,检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)以及肝组织中羟脯氨酸(HYP)、丙二醛(MDA)、过氧化物歧化酶(SOD)水平,并进行组织病理学相关检测。应用免疫组织化学技术(SABC法)检测肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和β-连蛋白(β-catenin)的表达。
结果:(1)对肝重、肝系数水平的影响:与正常对照组相比,模型组小鼠肝重、肝系数明显升高,FAC及EGCG各剂量组能不同程度地降低肝纤维化小鼠肝重、肝系数。(2)光镜观察显示:模型组小鼠肝组织病理损害严重,肝索排列紊乱,肝小叶结构破坏,肝小叶周围明显坏死,且有假小叶形成,FAC及EGCG各剂量组均在不同程度上减轻了上述病理状况,FAC-3高剂量组、EGCG-2中剂量组和EECG-3高剂量组效果显著(P<0.01)。(3)透射电镜观察显示:FAC及EGCG各剂量组可减轻肝纤维化小鼠肝细胞受损程度。(4)对血清ALT、AST、ALB水平的影响:与正常对照组相比,模型组小鼠血清中的ALT、AST水平显著升高,ALB水平明显降低。FAC及EGCG各剂量组小鼠血清中ALT、AST显著降低(P<0.01),血清ALB水平不同程度地降低。(5)对肝组织SOD、MDA、HYP水平的影响:肝组织生化测定显示FAC及EGCG各剂量组可显著提高肝组织中SOD活性,降低MDA、HYP的含量(P<0.01,P<0.05)。(6)免疫组化结果显示:FAC及EGCG各剂量组可显著升高PPARγ、降低β-catenin在肝组织中的表达(P<0.01)。
结论:通过对肝组织光镜和透射电镜观察,显示FAC及EGCG抑制了CCl4诱导的小鼠肝纤维化的形成和发展。其作用机制可能与降低血清ALT、AST水平,抗肝细胞损伤;增强肝组织中SOD活性,降低MDA、HYP的含量,提高抗氧化能力及抑制胶原蛋白过度沉积;抑制β-catenin的表达、提高PPARγ的含量,干预wnt信号转导通路有关。FAC及EGCG各剂量组对各项指标的作用有所差异。