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目的：内质网(ER)是真核细胞中非常重要的细胞器,非常敏感,各种应激刺激均可导致内质网功能失调,即内质网应激(ERS)。ERS持续时间及应激水平对于应激细胞的功能与生存均具有重要影响,与多种人类疾病关系密切。我们前期实验结果表明,高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对树突状细胞(DC)成熟分化具有重要免疫调节作用。本实验拟对ERS是否参与HMGB1对DC免疫调节机制进行探讨,旨在从新的角度认识ERS在HMGB1介导DC免疫功能障碍中的地位与调节机制,为探索严重烧伤后脓毒症的免疫调控途径提供新思路。方法：采用雄性BALB／c小鼠分离培养脾脏DC,以含10%胎牛血清RPMI-1640调整细胞浓度1-2×106／ml,5%CO237℃培养过夜后随机分组进行如下实验：1.给予HMGB1(0.1-10μg／ml)或衣霉素(TM,ERS特异性诱导剂,0.1.10μg／ml)刺激24-72 h后,应用real time-PCR技术及Western blot分析检测ERS相关的关键分子(GRP78、SEPS1及XBP-1)表达及活化水平的改变。2.给予TM(0.1-10μg／ml)刺激24-72 h后,流式细胞术检测DC表面标志物及共刺激分子的表达情况；应用ELISA和real time-PCR技术检测TNF-α、IL-12的分泌水平。另外,采用MTT试剂盒检测其对T淋巴细胞增殖活性的影响。3.通过RNA干扰技术诱导DC中ERS关键调节分子XBP-1基因沉默后,给予HMGB1刺激(1μg／ml,48h),采用Western blot分析、流式细胞术、ELISA、real time-PCR等技术方法检测抑制ERS反应对HMGB1调节DC成熟分化效应的影响。4.给予TM刺激(1μg／ml,48h)正常DC,或HMGB1(1μg／ml,48h)刺激XBP-1基因沉默型DC后,流式细胞术检测DC表面晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达水平。结果：1.ERS在HMGB1诱导DC成熟分化过程中具有重要作用。HMGB1刺激可明显诱导DC中ERS反应的发生,与正常对照组相比,0.1μg／ml、1μg／ml、10μg／ml的HMGB1作用24～72h后,DC中ERS相关分子GRP78基因及蛋白水平均明显升高,XBP-1表达及活化水平亦有显著上调,其中尤以1μg/ml HMGB1刺激24 h作用效果显著(P<0.05)。但与ERS特异性诱导剂TM作用不同的是,除0.1μg/ml HMGB1作用48 h诱导SEPS1的蛋白表达水平升高外(P<0.05),本实验所观察的其他刺激浓度和作用时间未能引起SEPS1表达的明显上调。2.TM诱导药物性ERS反应对DC功能状态有一定的影响。0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml的TM作用24～72 h可导致TNF-α、IL-12的分泌增加(P<0.05),但DC表面共刺激分子表达改变不尽一致,CD80表达在0.1μg/ml TM刺激48h、MHC-Ⅱ表达在0.1μg/ml和1μg/ml TM刺激24-48 h可见明显增强,而CD86在本实验观察的TM各刺激浓度和时间点无显著升高。与HMGB1预孵育DC增强T淋巴细胞增殖反应不同,TM预孵育的DC对T细胞增殖活性具有明显抑制效应(P<0.05)。3.小鼠脾脏DC经XBP-1基因沉默后给予HMGB1刺激(1μg/ml,48 h),与非基因沉默细胞(未转染或转染无效序列)相比,其表面标志物及共刺激分子表达上调均明显受抑,对T淋巴细胞增殖反应及Thl功能极化的促进作用亦明显降低(P<0.05)。4.与非基因沉默细胞(未转染或转染无效序列)相比,XBP-1基因沉默阻抑HMGB1诱导的DC表面RAGE受体表达的上调(P<0.05)。TM诱导的药物性ERS反应对DC表面受体RAGE表达具有明显的上调作用(P<0.05)。结论：HMGB1刺激可诱导小鼠脾脏DC发生明显的ERS反应,应用RNA干扰技术抑制ERS反应中关键分子XBP-1的活化可阻抑HMGB1介导的DC成熟分化和表面受体RAGE的表达上调。TM诱导的ERS反应与HMGB1所致ERS反应呈现一定的差异,TM刺激可增加DC细胞因子TNF-α及IL-12的分泌,但对其表型的成熟无明显的诱导效应,TM预孵育DC对T淋巴细胞的增殖反应呈抑制作用。ERS在HMGB1诱导的DC成熟分化中具有重要意义。