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目的FIZZ1/RELMα(found in inflammatory zone1/resistin-like molecule alpha)是近年来发现的在肺组织内特异性表达的分泌型蛋白,研究表明FIZZ1/RELMα与肺部炎症及气道重塑有着密切关系,本课题组前期的研究发现FIZZ1/RELMα在香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)大鼠模型中表达增加,但是具体机制尚未阐明。本实验主要探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extraction,CSE)对大鼠肺泡上皮细胞株FIZZ1/RELMα表达的影响,研究FIZZ1/RELMα与白细胞介素-8(leukocyte8,IL-8)的关系,以期阐明其与COPD的内在关联。方法(1)体外培养大鼠肺泡上皮细胞株CCL-149,以CSE刺激CCL-149细胞,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测FIZZ1/RELMα mRNA的表达;激光共聚焦免疫荧光细胞化学法、蛋白质免疫印迹法(western blot)研究FIZZ1/RELMα蛋白的表达水平。(2)以重组FIZZ1/RELMα蛋白刺激细胞,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测在不同浓度及刺激时间下IL-8的变化。结果(1)结果显示在无外源性刺激情况下CCL-149细胞中FIZZ1/RELMα基因和蛋白表达极低。经5%CSE刺激后,CCL-149细胞中FIZZ1/RELMα mRNA表达增加,与对照组相比差异有统计学意义(P <0.05)。Western blot显示5%CSE可以上调FIZZ1/RELMα蛋白的表达,并且在一定范围内FIZZ1/RELMα的蛋白表达量与刺激时间呈正相关(相关系数r=0.92,P <0.01)。激光共聚焦免疫荧光化学法显示,对照组胞浆中可见极弱的绿色荧光,而经5%CSE刺激24h后,实验组胞浆中绿色荧光非常明显,可见由香烟烟雾提取物上调的FIZZ1/RELMα主要表达于细胞浆中。(2)在一定范围内,随着重组FIZZ1/RELMα蛋白刺激浓度的增加和时间的延长,IL-8的表达水平增加,且与FIZZ1/RELMα刺激浓度、刺激时间呈正相关(相关系数r分别为0.904、0.777,P均<0.01)。结论(1) FIZZ1/RELMα在肺泡上皮细胞株可以被香烟烟雾提取物诱导高表达。(2)重组FIZZ1/RELMα蛋白可以诱导IL-8的表达增加,重组蛋白FIZZ1/RELMα可能通过诱导IL-8的高表达来参与COPD的气道炎症及气流阻塞过程。