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目的:1)验证CDKN1A是kshv-mir-k12-1-5P的靶基因。分析kshv-mir-k12-1-5P与CDKN1A参与的信号通路及通路上的关键基因(CyclinD1、CyclinE);2)分析kshv-mir-k12-1-5P通过信号通路与CDKN1A的相互调控作用;分析kshv-mir-k12-1-5P和CDKN1A对CyclinD1、CyclinE的调控作用;3)通过一系列体外细胞生物学功能实验,分析过表达kshv-mir-k12-1-5P或抑制表达kshv-mir-k12-1-5P后对卡波西肉瘤细胞株SLK生物功能的影响。方法:1)靶基因软件预测kshv-mir-k12-1-5P的靶基因,双荧光素酶试验验证CDKN1A是否是kshv-mir-k12-1-5P的靶基因,通过GO和KEGG分析kshv-mir-k12-1-5P与CDKN1A参与的信号通路及通路上的关键基因(CyclinD1、CyclinE),使用免疫组化法在蛋白水平上检测上述信号通路关键基因(CyclinD1、CyclinE)及靶基因(CDKN1A)在KS及瘤旁组织中的表达情况。分析其与患者性别、民族、年龄、临床类型等的相关性;2)研究过表达或低表达kshv-mir-k12-1-5P后,采用Western Blot及qPCR检测靶基因(CDKN1A)及信号通路关键基因(CyclinD1、CyclinE)在蛋白水平和mRNA水平的表达情况;研究过表达或低表达CDKN1A后,采用Western Blot及qPCR检测信号通路关键基因(CyclinD1、CyclinE)的表达。采用qPCR检测kshv-mir-k12-1-5P的表达情况;3)研究过表达或低表达kshv-mir-k12-1-5P后,kshv-mir-k12-1-5P对卡波西肉瘤细胞株SLK的生物学行为的影响:(1)使用CCK-8法检测细胞增殖;(2)使用双染法检测细胞凋亡;(3)使用PI法检测细胞周期;(4)使用划痕试验检测对细胞迁移的影响。(5)使用Transwell小室检测对细胞侵袭的影响。结果:1)通过在线miRNA靶基因软件Mirbase,Miranda和Targetscan预测CDKN1A可能是kshv-mir-k12-1-5P的靶基因。双荧光素酶试验验证CDKN1A为kshv-mir-k12-1-5P的靶基因(P<0.05)。通过GO和KEGG分析得出kshv-mir-k12-1-5P及靶基因CDKN1A主要参与P53信号通路、cell cycle信号通路,CyclinD1、CyclinE为通路上的关键基因。CDKN1A、CyclinD1、CyclinE在肿瘤组织中与瘤旁组织中的表达差异有统计学意义(P<0.05),CDKN1A在卡波西肉瘤中的阳性表达率低于瘤旁组织中的阳性表达率(P<0.05),CyclinD1、CyclinE在卡波西肉瘤中的阳性表达率高于瘤旁组织中的阳性表达率(P<0.05);在卡波西肉瘤中CyclinD1同年龄相关(P<0.05),在卡波西肉瘤中CyclinE同民族相关(P<0.05);在卡波西肉瘤中CDKN1A与CyclinD1、CyclinE均呈负相关(P<0.05)。CyclinD1与CyclinE呈正相关(P<0.05);2)(1)Western Blot及qPCR结果显示:kshv-mir-k12-1-5P抑制CDKN1A表达(P<0.05);kshv-mir-k12-1-5P促进CyclinD1、CyclinE表达(P<0.05);(2)Western Blot结果显示:CDKN1A抑制CyclinD1、CyclinE表达(P<0.05);qPCR结果显示:CDKN1A抑制CyclinD1、CyclinE、kshv-mir-k12-1-5P表达(P<0.05);3)(1)kshv-mir-k12-1-5P mimics组促进SLK细胞增殖,增殖率为111.70±0.90%。kshv-mir-k12-1-5P inhibitor组抑制SLK细胞增殖,增值率为91.21±1.01%。因此kshv-mir-k12-1-5P促进SLK细胞增殖(P<0.05);(2)kshv-mir-k12-1-5P mimics组降低细胞凋亡,凋亡率为2.44%±0.05,kshv-mir-k12-1-5P inhibitor促进细胞凋亡,凋亡率为8.99%±0.17。因此kshv-mir-k12-1-5P抑制SLK细胞凋亡(P<0.05);(3)kshv-mir-k12-1-5P mimics组PI最高,PI值为51.43%±0.15,kshv-mir-k12-1-5P inhibitor组PI最低,PI值为32.74%±1.28,因此kshv-mir-k12-1-5P可以缩短SLK细胞周期,使细胞增殖变快(P<0.05);(4)kshv-mir-k12-1-5P mimics组促进细胞迁移,48小时后减少的划痕面积为489133.33±26709.34,kshv-mir-k12-1-5P inhibitor组抑制细胞迁移,48小时后减少的划痕面积为241147.00±64077.93。因此kshv-mir-k12-1-5P增强SLK细胞迁移的能力(P<0.05);(5)kshv-mir-k12-1-5P mimics组增加了细胞侵袭数目,侵袭细胞数目为49.40±2.88个,kshv-mir-k12-1-5P inhibitor组减少细胞侵袭数目,侵袭细胞数目为23.60±1.67个,因此kshv-mir-k12-1-5P增强SLK细胞侵袭的能力(P<0.05)。结论:1)在卡波西肉瘤中kshv-mir-k12-1-5P通过信号通路与靶基因相互调控,共同调控CyclinD1、CyclinE基因,发挥促癌基因作用;2)kshv-mir-k12-1-5P可以促进卡波西肉瘤细胞增殖、抑制卡波西肉瘤细胞凋亡,促进卡波西肉瘤细胞周期进展,促进卡波西肉瘤细胞侵袭和迁移,正性调控卡波西肉瘤的生物学行为。有望成为卡波西肉瘤治疗的靶标。