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J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒（Subgroup J Avian Leukosis virus,ALV-J）引起的肿瘤性传染病。ALV-J最早发现于商品肉鸡,但近年来在我国蛋鸡群和本地鸡群中也大规模流行。该病毒宿主范围明显扩大,致病性增强,且囊膜蛋白出现了明显的变异。gp85蛋白是ALV-J的囊膜表面蛋白,含有病毒-受体决定簇,能够识别宿主细胞膜上的特异性病毒受体,从而决定亚群特异性及宿主范围。本研究鉴定了ALV-J gp85蛋白与细胞受体的关键结合域,并进一步研究了gp85蛋白序列的差异对其与受体结合的影响及可能的机制。已有多篇文献报道,AE亚群ALV的gp85蛋白与相应受体的结合域集中在hr1、hr2区域。为鉴定ALV-J的gp85蛋白与细胞受体chNHE1的结合域,本研究表达了可溶性的具有生物学活性的ALV-J原型株HPRS-103 gp85蛋白,利用流式细胞术建立了检测gp85蛋白与受体chNHE1结合能力的方法。采用HA标签逐段替换gp85蛋白全序列的策略,共构建了33个嵌合质粒,表达并纯化了33种gp85嵌合蛋白。受体结合实验结果表明,23种嵌合的gp85蛋白丧失了与chNHE1的结合能力。病毒阻断实验进一步证实,gp85蛋白与受体chNHE1的结合域集中在第37-283位不连续的氨基酸序列区域,不仅限于hr1、hr2区域。对多株ALV-J的gp85蛋白序列比对发现,近些年国内流行株的gp85序列与以HPRS-103为代表的肉鸡分离株的gp85序列间存在规律性的氨基酸变异。复制动力学检测结果表明,国内流行株JL08CH3-1的复制能力明显高于原型株HPRS-103。受体结合实验证明,JL08CH3-1的gp85蛋白（JL3-1-gp85）与chNHE1的结合能力高于HPRS-103的gp85蛋白（HPRS-103-gp85）,且二者的受体结合能力差异随gp85蛋白浓度降低而更加明显。为探讨复制能力和受体结合能力的差异是否与规律性的氨基酸变异有关,对两组gp85蛋白氨基酸序列进行比对,发现在受体结合域内两组蛋白存在23个氨基酸差异位点。以HPRS-103-gp85为骨架,将该23个差异位点突变成JL3-1-gp85相应的氨基酸。受体结合试验证明,只有E114-/R117G/N123I三个氨基酸协同突变的HPRS-103-gp85(HPRS-103-gp85 E114-/R117G/N123I)与受体结合能力明显升高,与JL3-1-gp85的受体结合能力相近。为进一步验证这一结果,可溶性表达了受体功能域chNHE1的第一个膜外环（chECL1）,利用表面等离子共振技术检测不同gp85蛋白与chECL1蛋白的亲和力。结果表明,JL3-1-gp85和HPRS-103-gp85E114-/R117G/N123I与受体功能域chECL1的亲和力都约为HPRS-103-gp85的2倍,进一步证实,JL3-1-gp85与细胞受体的亲和力高于HPRS-103-gp85的受体亲和力,且该亲和力差异是由gp85序列的114,117和123位氨基酸突变所致。本研究首次鉴定了ALV-J gp85蛋白与chNHE1的结合域,并证实中国流行株JL3-1-gp85与受体chNHE1的结合能力高于原型株HPRS-103,其结合力差异是由gp85蛋白的114,117和123位氨基酸突变所致。这一结果表明,ALV-J国内流行株通过囊膜蛋白氨基酸的规律性变异和持续进化,增强了其与受体的结合能力,从而提高了病毒的复制能力。该结果也为研究ALV-J的感染及致病机制奠定了基础。