蓝舌病(Bluetongue,BT)是由蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)感染引起的一种以昆虫为传播媒介的反刍动物的病毒性传染病,临床症状主要为鼻和唇粘膜充血、流涎、呼吸困难、舌头发绀。BT在世界范围内广泛流行,对全球畜牧养殖业危害极大。预防接种是防控BT的有效措施之一,市场上用来防控BT的疫苗主要有减毒活疫苗和灭活疫苗,但两者都有一定的缺点,目前仍无安全、高效的疫苗上市。VP2蛋白位于BTV外壳的最外层,含有主要的抗原决定簇,能诱导机体产生中和性抗体,在机体抗病毒免疫过程中发挥重要作用。有研究证实,单独的VP2蛋白足以使机体产生保护性免疫应答。本研究旨在利用原核表达系统表达可溶的BTV1 VP2蛋白,并对其免疫原性进行分析,为进一步开展BTV1 VP2蛋白的相关研究奠定基础。本研究采用PCR方法扩增BTV1 VP2基因序列,构建重组质粒p ET-28a-VP2。将阳性重组质粒转化BL21(DE3)和Rosetta(DE3)感受态细胞,诱导表达,并对其进行鉴定。结果表明,两种菌株均能表达重组VP2蛋白,分子量约为109 KDa,在Rosetta(DE3)菌株中可溶性表达效果更好;同时,对Rosetta(DE3)菌株的表达条件进行优化。结果显示,IPTG浓度为0.6 mmol/L、16℃诱导表达16 h时,重组VP2蛋白可溶性表达量最高;通过镍柱亲和层析法纯化重组VP2蛋白,Bradford法测定其浓度为0.4 mg/m L。Western-blot结果显示,重组VP2蛋白能与BTV1阳性血清反应。表明本研究制备的重组VP2蛋白具有良好的免疫反应性。纯化的重组VP2蛋白,以30μg/只的剂量免疫5只6～8周龄Balb/c小鼠,每3周免疫一次,免疫三次。Dot-ELISA结果表明,小鼠的免疫血清能与BTV1灭活病毒发生特异性反应;间接ELISA结果显示小鼠血清效价可达1:2.048×10~5,说明经重组VP2蛋白免疫后的小鼠体内产生了高水平的特异性抗体;间接免疫荧光(IFA)结果显示,经重组VP2蛋白免疫后产生的抗体能与真核系统表达的VP2蛋白发生特异性反应。本研究表达的重组VP2蛋白不仅为研究其结构和功能提供了实验材料,还为研发安全、高效的BT亚单位疫苗奠定了基础。