【摘 要】
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该研究构建了HIF-1α siRNA表达质粒,并初步研究其对视网膜新生血管的抑制作用.目的:通过基因重组技术构建HIF-1αdsRNA重组质粒,探讨其对HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的调控作用以
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该研究构建了HIF-1α siRNA表达质粒,并初步研究其对视网膜新生血管的抑制作用.目的:通过基因重组技术构建HIF-1αdsRNA重组质粒,探讨其对HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的调控作用以及对氧诱导小鼠视网膜新生血管的抑制作用.方法:1.设计合成HIF-1αsiRNA片段381和928,通过基因重组技术将HIF-1α siRNA片段381和928插入pSUPER.retro载体中,从而构建HIF-1α siRNA表达质粒pSUPER-dsRNA928和pSUPER-dsRNA381,通过转化大肠杆菌,抽提质粒,采用双酶切(Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ)和测序加以鉴定,以利于基因功能的研究.2.通过脂质体分别介导pSUPER-dsRNA928和pSUPER-dsRNA381转染鼻咽癌细胞,对照组转染pSUPER.retro空载体,采用半定量RT-PCR方法检测HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达.结论:我们成功地构建了HIF-1αsiRNA重组质粒pSUPER-dsRNA928和pSUPER-dsRNA381.HIF-1α siRNA表达质粒pSUPER-dsRNA928能明显抑制HIF-1αmRNA和VEGFmRNA的表达,且能明显抑制视网膜新生血管的生长,对正常视网膜血管无抑制作用.
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