猪流感(swineinfluenza，SI，是由猪流感病毒(swineinfluenzavirus，SIV)引起的一种急性传染性呼吸道疾病，该病会对养猪业造成重大的经济损失并危害人畜健康。NS1是病毒的重要调节蛋白，与病毒毒力有关，并和细胞内的多种蛋白相互作用，发挥多种不同的生物学功能，NS1可用来区分自然感染猪群与灭活疫苗免疫猪群。NP基因高度保守，其编码核衣壳蛋白，是病毒分型的主要依据。
　　本研究对猪流感病毒H1N2亚型A/swine/Shanghai/l/2007分离株的NS1、NP基因进行PCR扩增，并克隆到pET-32a(+)和pET-30a(+)表达载体，经PCR鉴定和酶切鉴定获得阳性克隆，对插入的DNA片段进行测序并证实其阅读框架正确。构建的重组质粒pET-32a(+)-NS1、pET-30a(+)-NP分别转化BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS感受态，经终浓度1mmol/L的IPTG诱导，结果表明NS1和NP基因在大肠杆菌中成功表达。重组蛋白NS1、NP分子量分别为43.9kD和63.4kD。重组蛋白NS1和NP经Ni2+亲和层析柱纯化后用BCA蛋白定量试剂盒分析，NS1、NP蛋白浓度分别为324.33μg/mL和320μg/mL。将纯化的蛋白腹腔免疫Balb/c小鼠，制备抗NS1和抗NP的多克隆抗体，并用间接ELISA方法检测其抗体效价。利用纯化的重组蛋白NS1作为诊断抗原建立了针对SIV抗体的间接ELISA检测方法，并确定了最优的工作条件。抗原最适包被浓度0.2μg/mL，鼠阳性血清最佳稀释度1∶10000，猪阳性血清最佳稀释度为1∶10，血清作用时间37℃60min，加入BL21(DE3)至诱导菌破碎液的终浓度为1%,酶标二抗稀释度1∶10000，酶标二抗作用时间37℃60min，判定阴阳性的临界值为0.286。特异性试验表明该NS1间接ELISA检测方法特异性较好，并且该方法能应用于自然感染和灭活疫苗免疫的鉴别诊断。
　　通过构建真核表达质粒pEGFP-N1-NS1、pEGFP-N1-NS、pEGFP-N1-NP转染MDCK细胞，表达带有绿色荧光蛋白标记的NS1、NS、NP蛋白，DAPI染色后荧光显微镜观察其细胞定位。构建真核表达质粒pCAGGS-NS1、pCAGGS-NS、pCAGGS-NP，并将其转染MDCK细胞表达NS1、NS、NP蛋白，利用抗NS1和抗NP多克隆抗体，进行间接免疫荧光试验，荧光显微镜观察表达的蛋白并确定其细胞定位。结果均表明NS1蛋白、NS蛋白(包括NS1和NS2)以及NP蛋白主要定位于细胞核，为进一步研究NS1、NP蛋白在病毒复制过程中的生物学功能和猪流感病毒的复制机理奠定基础。