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背景:近年来,癌症成为人类死亡主要的原因之一。食管癌(esophagus cancer,以下简称EC)是常见的消化道肿瘤之一,具有明显的地域特点,受饮食、生活习惯、环境等多方面因素影响。常见的组织学类型为食管鳞癌(esophageal squamous carcinoma,以下简称ESCC)和食管腺癌(esophageal adenocarcinoma,以下简称EAC)。在我国主要以ESCC为主,而西方国家EAC发病率逐年上升超过ESCC[1]。早发现早治疗是治疗该病有效的措施,早期手术治疗预后较好。但由于其发病比较隐匿,发现时常处于中晚期,故常失去手术机会,通常以化疗、放疗等手段来控制病情,但预后较差,五年生存率较低。尽管如此,化疗仍是主要治疗手段。研究表明,紫杉醇(paclitaxel,以下简称PTX)联合铂类治疗食管癌的效果与氟尿嘧啶(fluorouracil,FU)联合铂类相当,被美国国立综合癌症网络(National Comprehensive Cancer Network,以下简称NCCN)推荐为EC的一线化疗用药[2],广泛应用于临床。但对于体质较差及老年患者来说,不能耐受联合顺铂所引起的不良反应,因此,寻找一种安全低毒的药物来联合PTX对患者来说是有益的。中医药在癌症中应用早有报道,且疗效可靠[3,4]。目的:研究龙蒿乙醇提取物6-甲基香豆素(6-methylcoumarin,以下简称COU)联合PTX对人食管癌细胞株Ec-109细胞增殖、细胞迁移、基因表达、蛋白表达等方面的影响,探讨两药联合对Ec-109细胞的作用及其可能机制。方法:选取COU浓度为:0、3.125、6.25、12.5、25、50ug/mL;PTX浓度为:0、0.25、0.5、1、2、4ug/mL;(1)MTT试剂盒法检测对照组、COU、PTX及两药联合组对食管鳞癌细胞株Ec-109细胞增殖的影响;(2)细胞划痕法检测药物作用后细胞迁移能力的变化;(3)Real-Time PCR方法检测药物作用后Ec-109细胞中Cyclin-D1、EGFR、FOXO3a、Caspase-3基因表达的变化;(4)细胞免疫荧光方法检测药物作用后Ec-109细胞中Cyclin-D1、EGFR、FOXO3a、Caspase-3蛋白定位表达的变化。结果:(1)药物作用后,与对照组比较:COU对食管癌Ec-109细胞有明显的抑制作用,(P<0.05);PTX对食管癌Ec-109细胞有明显的抑制作用,(P<0.05);两药联合组抑制作用增强,(P<0.05)。与单药组比较:两药联合组抑制作用增强,(P<0.05)。(2)与对照组比较:COU及PTX作用后Ec-109细胞的迁移能力减弱,(P<0.05);两药联合组作用后Ec-109细胞的迁移能力减弱更显著,(P<0.05)。(3)与对照组比较:EGFR基因在COU作用后无差异(P>0.05);PTX作用后下调,(P<0.05);两药联合作用后基因下调更显著(P<0.05)。Cyclin-D1基因在COU作用后无差异(P<0.05),PTX作用后下调,(P<0.05);两药联合作用后基因下调更显著(P<0.05)。Caspase-3基因在COU、PTX作用后表达上调,有显著性差异(P<0.05);两药联合作用后食管癌Ec-109细胞Caspase-3基因的表达上调更显著,(P<0.05)。FOXO3基因在COU作用后无差异(P>0.05);PTX作用后上调,(P<0.05);两药联合作用后基因上调更显著(P<0.05)。(4)与对照组比较:两药联合组作用后食管癌Ec-109细胞Cyclin-D1、EGFR蛋白表达减弱;两药联合组作用后食管癌Ec-109细胞Caspase-3、FOXO3a蛋白表达增强。结论COU、PTX均对人食管癌Ec-109细胞有抑制作用,且两药联合抑制作用更显著,作用机制可能是通过影响Cyclin-D1、EGFR、Caspase-3、FOXO3a基因及Cyclin-D1、EGFR、Caspase-3、FOXO3a蛋白的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖和迁移。