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【目的】慢性髓细胞性白血病(chronic myelognous leukemia,CML)是一种起源于骨髓多能造血干细胞的恶性增殖性疾病,以融合蛋白bcr-abl的出现为主要遗传系特征。慢性白血病急性发作是以大量白血病细胞从骨髓释放入外周血并浸润各种组织为主要特征,恶性肿瘤的转移所导致的多脏器功能衰竭是患者死亡的重要因素[1],防止肿瘤转移是肿瘤治疗的关键之一。生长因子受体连接蛋白-2(the growth factor receptor -bound protein-2,,Grb2)与许多癌症关系密切,在慢性粒细胞白血病中,Grb2直接或通过SHC分子与bcr-abl融合蛋白结合,激活RAS信号通路,导致造血细胞恶性转化,其相关信号转导通路的阻断在CML治疗中具有重要意义。本研究探讨Grb2的抑制对K562细胞侵袭和迁移能力的影响并分析可能的影响因素,以期为肿瘤浸润转移的基因治疗提供新的思路。【方法】1、构建针对Grb2基因的siRNA的原核表达载体根据GenBank中Grb2的序列设计4对互补的siRNA寡核苷酸链,将正、负DNA单链退火后分别与pSilencer4.1-CMV原核表达载体相连,并转化大肠杆菌TOP10,挑取氨苄青霉素抗性菌落并扩增培养,经快速小量制备质粒及核酸测序鉴定,证实pSilence-4.1CMV-Grb2原核表达载体构建成功。2、稳定转染K562细胞以脂质体介导法将pSilence-4.1CMV-Grb2原核表达载体转染人慢性髓细胞性白血病细胞K562,应用潮霉素筛选稳定表达siRNA的细胞克隆,通过Western blot和RT-PCR技术,检测在转染了含有Grb2 siRNA重组质粒的K562细胞(K562/pSilence-4.1CMV-Grb2)、转染空载体组细胞(K562/ pSilence-4.1CMV)和未转染组细胞(K562)中Grb2的表达情况。3、细胞迁移和侵袭能力检测应用体外迁移和侵袭能力实验测定上述各组细胞的迁移和侵袭能力。【结果】成功构建了pSilence-4.1CMV-Grb2原核表达载体,该重组质粒可通过脂质体介导转染人慢性髓细胞性白血病细胞K562,获得稳定表达siRNA原核载体的细胞株K562 /pSilence -4.1CMV -Grb2/405、K562/pSilence-4.1CMV-Grb2 /541及K562/pSilence-4.1CMV-Grb2/215;通过Western blot和RT-PCR检测可见K562 /pSilence-4.1CMV-Grb2/405细胞较K562/pSilence-4.1CMV-Grb2/541、K562/pSilence-4.1CMV-Grb2/215、K562/pSilence-4.1CMV和K562细胞Grb2蛋白和核酸的表达水平显著降低;侵袭迁移实验表明,K562/pSilence4.1CMV-Grb2/405与K562/pSilence-4.1CMV和K562细胞相比,细胞迁移和侵袭能力均下降。【结论】RNAi原核表达载体pSilence-4.1CMV-Grb2可以通过脂质体稳定转染入人慢性髓细胞性白血病细胞K562中,pSilence-4.1CMV-Grb2/405可有效抑制K562细胞Grb2蛋白和核酸的表达,并显著降低K562细胞迁移和侵袭能力,为进一步研究以Grb2为靶点的抗肿瘤治疗奠定了基础。