内蒙古绒山羊骨骼肌差异蛋白质组学研究

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羊肉作为肉类消费的重要组成部分,其肉质风味,营养价值、肉品分级受到越来越多的消费者关注。本研究对内蒙古绒山羊不同部位肌肉进行基础理化特性及蛋白质分子组成进行研究,探索不同部位肉质差异,对指导提高肌肉质量有着重要意义。本研究首先测定臂三头肌、股二头肌、背最长肌、肋间肌、臀肌肌肉的氨基酸及脂肪酸的组成;之后采用IDA(数据依赖采集)方法鉴定五个部位骨骼肌总蛋白,并对总蛋白进行GO富集分析及KEGG通路分析;然后基于SWATH(非标记定量)方法挖掘五个部位的差异蛋白,并对差异蛋白的功能及调控的通路进行探索;最后对MYL3蛋白进行western blot定量研究,并通过免疫组化方法对其进行定位研究。取得研究结果如下:1、对臂三头肌、股二头肌、背最长肌、肋间肌、臀肌中的15种氨基酸含量进行显著性分析发现:背最长肌中谷氨酸、天冬氨酸、赖氨酸、精氨酸、组氨酸的含量显著高于肋间肌(p<0.05);股二头肌中天冬氨酸、组氨酸含量显著高于肋间肌(p<0.05);臂三头肌中赖氨酸、组氨酸含量高于肋间肌(p<0.05)2、对臂三头肌、股二头肌、背最长肌中的34种脂肪酸研究发现:不饱和脂肪酸亚麻酸甲酯(C18:2C9)、芥酸甲酯(C22:1)、顺式-11,14,17-二十碳三烯酸甲酯(C20:3N3)在不同部位间的差异极显著(P<0.01)。3、对内蒙古绒山羊臂三头肌、股二头肌、肋间肌、背最长肌、臀肌五个部位总蛋白质鉴定,共检测到1227个蛋白、17915条肽段。臂三头肌中检测到总蛋白707个,8111条肽段;股二头肌肌肉中检测到个727个蛋白,7899条肽段;肋间肌肌肉中检测到个647个蛋白,7282条肽段;背最长肌中检测到个587个蛋白,6943条肽段;臀肌肌肉中检测到645个蛋白,7618条肽段。4、对总蛋白进行GO组分富集分析,1227个蛋白富集到了18个生物学过程(Biological Process,BP)中;20个细胞组分(Cellular Componant,CC)中;20个分子功能(Mollecular Function,MF)中。并通过KEGG通路分析,总蛋白中1098个蛋白覆盖到33个通路中。5、通过SWATH方法筛选出内蒙古绒山羊不同部位骨骼肌差异蛋白166个,其中臂三头肌、股二头肌、肋间肌、背最长肌和臀肌中差异蛋白分别为16个、31个、9个、39个和31个。筛选出与肌纤维结构和功能等相关的差异蛋白15个,肌纤维结构蛋白4个,分别为MYL3、MYL1、MYL6B、MYH4。6、通过western blot技术检测MYL3蛋白在不同肌肉中的表达量,结果显示MYL3蛋白在股二头肌中表达量最高,这与蛋白质组结果相一致。7、免疫组化结果显示MYL3蛋白在臂三头肌、股二头肌、肋间肌、背最长肌、臀肌中均有阳性反应,但在股二头肌中表达较高,与蛋白组和western blot结果相一致,定位结果显示MYL3蛋白可能定位于Ⅰ型即氧化性肌纤维上。
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