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目的:微小RNA(microRNA)是一类长度约22nt的小分子非编码RNA,依赖于与靶mRNA的互补配对完成基因沉默这一细胞重要的自身调节过程。同时,病毒与宿主之间复杂的相互作用也与miRNAs所介导的RNA沉默途径密切相关。宿主细胞可以通过miRNA靶定病毒蛋白来对抗病毒感染,病毒则可以利用自身编码的miRNA抑制与免疫相关的细胞因子的表达,甚至利用宿主编码的miRNA促进其自身的增殖。本研究的主要目的是探究在HeLa细胞中miR-23a对HSV-1病毒增殖的影响,阐明miR-23a对病毒增殖调控的可能机制。方法:在宫颈癌细胞系HeLa中,分别应用过表达和封闭质粒将miR-23a过表达或抑制后,利用中性红染色实验、病毒空斑实验检测HSV-1增殖水平的变化,并用定量PCR检测HSV-1病毒包膜糖蛋白D的拷贝数以及滴定实验说明上清中子代病毒的浓度。应用生物信息学方法预测miR-23a的候选靶基因,以绿色荧光蛋白为报告分子,以预测的结合位点为反应元件,用荧光报告载体实验验证miR-23a对IRF1 mRNA的直接调控作用。在HeLa细胞中过表达或抑制miR-23a水平后,通过定量PCR和Western blot分别检测IRF1在mRNA和蛋白水平上的变化。并在miRNA过表达的同时,进一步过表达IRF1,检测由miRNA引起的病毒表型变化是否得到减轻或消除。最后利用中性红染色以及滴定实验检测IRF1诱导的下游蛋白viperin的表达对病毒的增殖影响。结果:1.病毒空斑、中性红染色以及real-timePCR方法确定miR-23a能够促进HSV-1在HeLa细胞中的增殖。2.荧光报告载体实验、real-time PCR以及western blot结果显示在HeLa细胞中miR-23a可以直接靶定IRFI并下调其表达。3.病毒空斑、中性红染色以及real-time PCR方法确定IRF1能够抑制HSV-1在HeLa细胞中的增殖。4.挽救实验证明IRF1可以削弱miR-23a的促病毒效应。5.病毒感染HeLa细胞后可诱导miR-23a的表达上调同时抑制IRF1的表达。6.IRF1通过诱导下游蛋白Viperin的表达抑制病毒增殖结论:在HeLa细胞中,miR-23a能够促进病毒新DNA的合成,释放子代病毒数的增加,整体表现为使病毒在宿主细胞中的增殖更加活跃。IRF1是宿主细胞的一种转录激活因子,它与宿主的固有免疫应答相关,miR-23a可以直接靶定IRF1并下调其表达水平,同时IRF1通过诱导下游蛋白viperin的表达削弱miR-23a促病毒增殖的作用。由此推测miR-23a利用RNAi形成的调控路径是其促进HSV-1增殖的可能机制,这将有利于我们更好得理解宿主与病毒间复杂的相互作用。