臂丛神经损伤是上肢致残的主要因素之一。20世纪70年代后,我国科学家通过膈神经移位治疗臂丛神经损伤,并首创健侧颈7神经移位方法,在术后手功能恢复上取得较大的进展,但手内肌功能的恢复仍处于起步阶段。随着对臂丛损伤研究的深入和新术式的出现,对臂丛损伤的精确诊断提出了要求。而新的诊断方法的建立,要在阐明肌肉萎缩的分子机制的基础上进行。本文从比较蛋白质组学的角度,对比人臂丛神经损伤后,萎缩的二头肌和小指展肌与正常胸锁乳突肌的蛋白质表达模式,以期找到导致肌肉萎缩进程的关键蛋白质,为臂丛神经损伤的临床诊断、治疗和预后检测提供可能的分子标记;并在此基础上,更进一步地探索失神经后肌肉萎缩的分子机制;同时也为人类疾病蛋白质组数据库,提供正常/萎缩人骨骼肌蛋白质表达的二维电泳图谱,完善人类疾病蛋白质组数据库。 我们使用了5种不同成分的裂解液,试验了一步抽提法和分步抽提法,通过对各种方法和不同裂解液效果的对比,经过抽提方法和上样、聚焦条件的优化,我们最终采用了含有CHAPS和SB3-10的裂解液作为对病人骨骼肌样品的抽提裂解液;为了得到更易于分析的二维电泳图谱,我们使用了17cm的非线性预制胶条,等电聚焦56,000vhr;最终得到了较好的重复性,以及在一张二维电泳凝胶上分离800多个蛋白质点的较高的分辨率。利用PD-Quest软件对每张凝胶经过点探测、点匹配和归一化之后,建立一个包括9例病人的失神经萎缩的二头肌、小指展肌和作为对照组的健康胸锁乳突肌的凝胶图像的Matchset。以18张萎缩肌肉的凝胶图像为实验组,9张健康肌肉的凝胶图像为对照组,做Student-t test。与对照组相比,表达水平有显著性差异(P<0.05)的蛋白质有30个。在这30个点中,有6个蛋白质点的表达在萎缩肌肉中升高,其余24个则降低;另有2个两个肌球蛋白质轻链的亚基,由于丰度较高,变化十分显著,在有些病例中几乎完全消失。此外,将这30个有表达差异蛋白质的表达水平进行进一步的分析,比较二头肌和小指展肌中他们表达量的差异,其中表达差异有一倍以上的蛋白质有7个。对这些候选蛋白质进行基质辅助激光解析电离—飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry-time of fly; MALDI-TOF)分析,得到这些蛋白质的肽指纹图谱,并在网上数据库进行搜索,得到了对其中7个表达差异蛋白质的鉴定;这些在萎缩肌肉中有表达差异的蛋白质是:人肿瘤蛋白hD54;SIPL蛋白/理论性蛋白,FLJ10913;含锰的超氧化物歧化酶(Manganese superoxide dismutase;