鱼类精核解凝相关蛋白的研究

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银鲫作为具有有性生殖方式的雌核发育种群,在鱼类育种、单性生物起源与进化、有性生殖与单性生殖的形成机制等方面具有无可比拟的研究价值。雌核发育就是精子进入卵后,只是起到激活卵子的作用,精核不解除凝集状态,不参与子代的发育。就一般的雌核发育生物而言,都必须具有两个特点:其一,卵子发生不经历正常的减数分裂过程,以保证产出的卵子染色体倍数没有减少;其二,雌核发育鱼卵子可以抑制外源精核在卵子内解凝,以保证卵子在受精时自身染色体不加倍。具有这两个性状的物种,便有了形成稳定雌核发育种群的基础。而银鲫在此基础之上还在具备另外两个特点,分别是:同源精核可以在卵细胞质中解凝;卵子可以接受部分来自精子的遗传信息,但染色体组一般不加倍。由此可见,银鲫具有极为复杂的生殖调控机制。前人的实验已经发现,在D系银鲫中,同源精子受精后,精核能够发生解凝,而异源精子受精后,精核则一直保持凝集状态,不发生解凝,父本遗传物质不参与到子代的发育过程中。但具体解凝的比例还不清楚,不同品系的银鲫之间,同源精子受精后精核发生解凝的情况是否一致也未见有研究报道。本研究首先采用体外精核解凝技术,分别提取A系和D系银鲫卵子的无细胞提取液,再将脱膜的A系和D系银鲫精子放入卵子的无细胞提取液中培育120分钟,结果发现银鲫不同品系中,精核在同品系卵细胞质中解凝的情况并不一致,D系精核在D系卵子无细胞提取液中培育120分钟后,解凝比例为85%;而A系精核在A系卵子无细胞提取液中培养相同时间后,解凝比例仅为15%。这一结果说明,银鲫不同品系之间繁殖方式可能有较大差异,D系银鲫既可以以雌核发育的方式进行繁殖,在与同源精子受精后也可以以两性生殖方式进行繁殖;而A系银鲫可能主要是以雌核发育的方式进行繁殖的。目前关于银鲫卵中抑制异源精核解凝的细胞因子还不清楚,哪些细胞因子特异性参与银鲫卵中同源精子的解凝活动也不知道。吴南等鉴定出来一个新型的组蛋白H2a蛋白家族成员H2aflo。该蛋白被磷酸化修饰,有介导染色质核小体形成膨松结构的潜能。本研究组前期采用体外精核解凝技术,发现在银鲫同源精子的精核解凝过程中,乙酰化的组蛋白H4和组蛋白变体H2aflo都能够进入精核。而在银鲫卵质中培育的异源精核则不能解凝,且乙酰化的组蛋白H4和H2aflo都不能进入精核,因此说明,母源性组蛋白不能进入精核,可能是异源精核不能在银鲫卵质中解凝的原因。那么,为什么母源性组蛋白不能进入银鲫卵质中的异源精核?又有哪些分子参与到母源性组蛋白进入精核从而帮助精核解凝的过程呢?为了寻找鱼类卵子中与精核解凝,尤其是与组蛋白沉积到精核这一过程相关的蛋白分子,本研究构建了应用于Sos细胞质酵母双杂交系统的斑马鱼cDNA文库,利用H2aflo蛋白作为诱饵,通过Sos细胞质酵母双杂交系统筛选斑马鱼卵细胞内与H2aflo相互作用的蛋白质。这可为进一步研究银鲫双重生殖方式的分子机制提供基础资料,同时也可以为进一步研究动物精核解凝的分子机制提供一个很好的平台。然而,经过长时间的努力,目前还未找到与H2aflo相互作用的蛋白质,只是为后人的研究积累一些经验。
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