【摘 要】
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目的:观察高糖条件下,硫化氢对肾小球系膜细胞自噬的影响及其分子机制。方法:用Na HS作为H2S的供体,选取不同浓度的H2S刺激肾小球系膜细胞48h,通过检测细胞活力和细胞增殖实
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目的:观察高糖条件下,硫化氢对肾小球系膜细胞自噬的影响及其分子机制。方法:用Na HS作为H2S的供体,选取不同浓度的H2S刺激肾小球系膜细胞48h,通过检测细胞活力和细胞增殖实验,选定其最佳浓度用于后续实验。分别设立对照组(常规培养液)、高糖组(高含量葡萄糖培养液)、H2S组(常规培养液)、高糖+H2S组、高糖+Rapamycin(雷帕霉素,Rapamycin,自噬促进剂)组、高糖+Rapamycin+H2S组。用western blot检测各组自噬相关蛋白Microtubule-associated protein 1 light chain 3(MAP1-LC3,LC3)、Beclin-1、Sequestosome-1(SQSTM1/p62)表达量的变化,以及AMPK和m TOR磷酸化蛋白的表达情况。用免疫荧光、透射电镜观察各组自噬小体变化。用ROS试剂盒检测各组活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化。结果:Brdu结果显示300μM浓度的H2S是既不影响细胞增殖又不影响细胞活性的最适实验浓度。Western blot结果显示高糖处理细胞后,LC3和Beclin-1表达量增多,P62表达量降低;用H2S处理后可降低高糖所致的自噬水平变化;雷帕霉素预处理可抑制H2S降低高糖所致的自噬增强效应。免疫荧光检测结果和电镜检测结果与western blot所得相一致。此外,Western blot结果显示,各实验组相关自噬通路蛋白AMPK的磷酸化蛋白没有明显变化,而m TOR磷酸化蛋白表达量在经过H2S刺激后显著升高。ROS检测结果显示高糖组与对照组比较,ROS表达量升高,且加入H2S后ROS水平显著降低,而加入Rapamycin后ROS表达量升高。结论:高含量葡萄糖可引起肾小球系膜细胞自噬水平增加、ROS表达量升高;H2S具有降低这种自噬程度和ROS水平的效应,其机制可能是激活m TOR信号通路从而降低细胞中ROS水平而实现调节。
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