背景：结缔组织生长因子（connective tissue growth factor;CTGF）,是即刻早期基因CCN家族中的成员，又名CCN2,是Bradham等1991年从人脐静脉内皮细胞中分离出来的，由349个氨基酸残基组成的，富含半胱氨酸的结合肝素的分泌性多肽，相对分子质量为38000，由高尔基体分泌。CTGF分子含有4个高度保守的结构区域即（1）胰岛素样生长因子结合区（IGFBP），因含能与胰岛素样生长因子结合的序列而得以命名；（2）C型血管假性血友病因子重复区（VWC）；(3)血小板反应蛋白1重复区（TSP1）；(4)富含半胱氨酸羧基末端（CT）。在生理剂量下，CTGF发挥着调节细胞存活、增殖、分化、转移，促进血管生成，创伤修复，软骨生成和骨生成的作用，是机体生长发育过程中不可缺少的细胞因子。但CTGF的高表达及异位表达，与瘢痕形成，病理性纤维化，肿瘤形成等多种疾病的发生发展相关，多种癌症的治疗已把CTGF作为靶点；美国临床肿瘤协会2011年会中把CTGF作为攻克胰腺癌的候选靶点。因此，CTGF的抗体在今后的生命科学领域会发挥越来越大的作用。噬菌体展示技术的原理是将外源目的基因插入噬菌体编码蛋白衣壳的基因组中，使目的基因编码的蛋白表达在噬菌体的衣壳上，并通过扩增与生物淘选，使目的蛋白得到富集并被筛选出来。噬菌体展示技术广泛应用于疫苗的研制,医学诊断和治疗、酶抑制剂的筛选,多肽药物的开发、蛋白质相互作用的研究等,并显示了良好的应用前景本实验中通过噬菌体展示技术合成CTGF单链抗体的定向库，通过亲和筛选获得CTGF单链抗体，克服了生物工程制成的单抗亲和力可能会不高的缺点。定向库筛选，与大容量随机库筛选相比，假阳性率更低。通过细胞学实验，合成的单链抗体对胰腺癌的增殖凋亡有作用，为抗胰腺癌药物合成增加了一个新途径。目的：通过免疫小鼠获得抗CTGF抗体的基因，构建CTGF单链抗体展示文库，通过生物淘选获得CTGF的单链抗体。并作用于胰腺癌细胞系PANC-1细胞，观察单链抗体对PANC-1细胞的影响。方法：用重组人CTGF（rhCTGF）免疫balb/c小鼠，小鼠表达CTGF抗体后取脾脏获得B细胞，提取总RNA后反转录为cNDA，PCR扩增出小鼠含有CTGF抗体基因的重链及轻链可变区基因VH和VL，然后VH和VL再次PCR装配为vl-linker-vh基因片段。组装好的片段和噬菌粒PAK100经SfiⅠ酶切后通过Ｔ４连接酶连接，形成含有抗CTGF单链抗体基因的目的噬菌粒。目的噬菌粒电转化入大肠杆菌Xle-blue，加入辅助噬菌体扩增后，建立噬菌体展示库。噬菌体库与包被在96孔板上的CTGF结合，先洗去非特异性结合的噬菌体，再把特异性结合的噬菌体洗脱下来进行扩增，如此四轮之后，特异性结合的噬菌体就会得到富集，富集的噬菌体感染xle-blue菌并涂布在相应抗性的固体培养基上。挑单克隆用ELISA方法检测其亲和力，测定高亲和力的克隆的基因序列。将高亲和序列扩增，制成抗CTGF单链抗体，作用于panc-1细胞，用MTT实验及流式细胞实验，通过与阳性对照，阴性对照，空白对照的对比，观察单链抗体对胰腺癌细胞生长及凋亡的影响。结果：小鼠免疫成功，提RNA后反转录为cDNA,作为模版扩增单链抗体基因，经电泳证实，VH，VL成功扩增，CTGF单链抗体噬菌体展示库成功构建，经过四轮筛选，CTGF单链抗体富集了2000倍。ELISA检测单链抗体与CTGF的亲和力后，得到了10个高亲和力的克隆，经测序，10个克隆的基因序列相似度达到82%，其中两个克隆的序列完全一致，作为实验产物，用于后续实验。MTT及流式细胞实验证实，单链抗体抑制胰腺癌panc-1细胞的增殖，促进胰腺癌panc-1细胞的凋亡。结论：通过动物免疫的方法，构建的CTGF单链抗体的定向展示文库，与随机库相比，定向库中含有大量靶目标的基因，提高了筛选成功的可能性。经过四轮的筛选，得到CTGF单链抗体。因筛选过程为与目的蛋白结合的亲和筛选，实验产物为高亲和力抗人CTGF单链抗体。抗人CTGF单链抗体的成功合成，并对胰腺癌细胞有一定作用，为合成新的治疗胰腺癌的药物开辟了新的途径。