吉富罗非鱼IGF2基因分离及其多态性与鱼体型、增重相关性研究

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胰岛素样生长因子2(Insulin-like growth factor 2, IGF2)是控制动物生长和脂肪沉积的重要基因之一。本文分离了吉富罗非鱼(Genetic Improved Farmed Tilapia, GIFT)IGF2基因6746 bp,包含有4个外显子和3个内含子,开放阅读框为669 bp,编码222个氨基酸,5’非翻译区379 bp,3’非翻译区892 bp。氨基酸同源性比较表明,与鱼类同源性为64.1%-98.6%,与哺乳动物同源性为59.9%-63.2%。通过比对吉富罗非鱼10个体IGF2基因序列,以同一位点不同碱基出现的比例大于3/7,确定潜在的多态位点,结果共寻找到12处多态位点,其中11处为SNPs位点,1处为微卫星位点。本文建立了检测内含子1621nt C/T、外显子287ntT/G、外显子3161ntA/G和内含子3微卫星位点共4个位点基因型的方法,调查了192尾吉富罗非鱼的基因型,并分析不同基因型与体型、增重的相关性。使用四引物扩增受阻体系PCR(tetra-primer PCR method and the amplification refractory mutation system, Tetra-primers ARMS)检测内含子1621nt基因型,结果显示,CC、CT、TT基因型频率在雄鱼中分别为0.32、0.32、0.36,在雌鱼中分别为0.38、0.38、0.24;与体型、增重的相关性分析表明,此位点不同基因型只与雄鱼体型(体高/体长)显著相关(P<0.05),CC型个体显著高于CT和TT型个体。外显子287ntT/G颠换导致了HinfI酶切位点改变,使用PCR-RFLP法检测该位点基因型,结果显示整个试验群体中不存在GG基因型,雄鱼中,TT和TG基因型频率分别为0.33和0.67,而雌鱼群体中则为0.56和0.44;与体型、增重的相关性分析表明,此位点与雄鱼体型(体高/体长)显著相关(p<0.05),TT型个体体高/体长值显著高于TG型个体。外显子3A/G转换导致了MspI酶切位点改变,使用PCR-RFLP法检测该位点基因型,结果显示整个群体中不存在AA基因型,在雄鱼中,GG、AG基因型频率分别为0.71、0.29,而雌鱼中则为0.75和0.25;与体型、增重的相关性分析表明,此位点不同基因型只与雄鱼增重极显著相关(p<0.01),GG型的雄鱼明显较AG型增重快。使用PAGE电泳区分内含子3微卫星位点的不同等位基因,结果共有5种等位基因,13种基因型,雄鱼群体中,基因型频率为0-0.21,而雌鱼群体中则为0-0.25;与体型、增重的相关性分析表明,该位点与鱼体型无显著相关性,而与雄鱼的增重存在显著相关(p<0.05),CC型个体显著大于AD型个体。本文在IGF2基因共找到2个与雄性吉富罗非鱼体型相关的,2个与雄性吉富罗非鱼增重相关的分子标记,可成为今后选育的候选分子标记,并在今后的实践中加以检验。
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