金黄色葡萄球菌是引起化脓性疾病的重要病原菌，其产生的肠毒素则是世界范围内引起食物中毒的重要原因之一。其中以A型肠毒素引起食物中毒的发生率最高，因此，建立敏感、快速的检测金黄色葡萄球菌A型肠毒素(Staphylococcal aureusenterotoxins A，简称SEA)的方法，是进行食品安全检测，预防食物中毒的必要条件，也有助于金黄色葡萄球菌感染所致化脓性疾病的早期诊断，具有重要的临床意义和卫生意义。抗SEA单克隆抗体的应用，能够有效地提高检测的灵敏度和特异性。目前，国内市场上还不能提供有效的抗SEA单克隆抗体。因此，为了适应临床检测和基础研究的需要，本研究制备了抗SEA单克隆抗体，并在此基础上建立了检测食品中金黄色葡萄球菌A型肠毒素的间接竞争ELISA方法。本试验用SEA经多次免疫BALB／c小鼠后，取其脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞在50％PEG的作用下进行融合。用间接ELISA方法初步筛选出能分泌抗SEA单克隆抗体的杂交瘤细胞，用有限稀释法进行克隆化，直到克隆后的细胞孔达到100％阳性，即筛选到了只分泌一种抗体的杂交瘤细胞。本试验共筛选到三株杂交瘤细胞株，分别命名为3C1、3G10和2A10。对其进行鉴定，结果如下：在经4个月的连续传代培养和冻存6个月后复苏检测，其分泌抗体的能力差异不显著，表明其稳定性好；其染色体平均数目在87～98条之间；经亚类鉴定，三株杂交瘤细胞分泌的抗体类型均为IgG1亚类，轻链类型均为k链；ELISA交叉试验和Western-blot分析结果表明，三株抗金黄色葡萄球菌A型肠毒素的单克隆抗体与B型肠毒素、C1型肠毒素无任何交叉反应，且能特异性地与A型肠毒素结合；经抗原表位特异性分析，三株单克隆抗体的识别表位相同或相近；其相对亲和力的测定结果是3C1＞3G10＞2A10；抗体的效价水平为3C1＞3G10＞2A10，其中3C1株杂交瘤细胞的腹水效价达1∶819 200。以3C1杂交瘤细胞株的腹水型抗体为原料，建立了检测金黄色葡萄球菌A型肠毒素的间接竞争ELISA方法。通过对试验条件的系列优化，最终确定其反应条件如下：包被浓度为0.8μg／mL，包被条件为37℃2h；封闭条件为0.5％BSA封闭液37℃1h；抗体工作浓度为1∶9 600，样品和抗体的加样比为30∶70，竞争时间为37℃1h；酶标二抗浓度为1∶6000，反应时间为37℃30min；显色条件为37℃避光反应10min。在该反应条件下，获得一条标准曲线，其回归方程为y=-0.2902x+0.8338，相关系数r=0.9952，检测限为0.7311ng／mL，能满足目前对食品中肠毒素的检测要求。批内和批间变异系数分别为，1.22％～13.47％和9.31％～13.47％，具有较好的重复性和精确度；与B型和C1型肠毒素没有任何交叉反应，表明该方法的特异性强。用建立的检测A型肠毒素间接竞争ELISA方法对肉制品中添加的SEA进行检测。其定量限为0.8557ng／mL，平均回收率在60～120％之间，批内和批间变异系数均＜20％，说明本试验建立的检测金黄色葡萄球菌A型肠毒素间接竞争ELISA方法可用于临床检测，为金黄色葡萄球菌A型肠毒素检测试剂盒的研制奠定了基础，对预防葡萄球菌性食物中毒具有积极作用。