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槐角为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥成熟果实。冬季采收，除去杂质，干燥。中国药典（2010年版一部）记载其用于清热泻火，凉血止血，肠热便血，痔肿出血，肝热头痛，眩晕目赤，为常用中药。槐角中含多种化学成分，包括黄酮、三萜皂苷、生物碱、磷脂、氨基酸以及多糖等。黄酮是槐角中的一类主要活性成分。迄今为止国内外学者对该植物化学成分鉴定与分离研究为较广泛,而对于其质量评价与体内药代动力学研究涉及较少。本研究以槐角为载体，以黄酮类成分为研究对象，以液质联用（HPLC-MS）技术为分析手段，探讨复杂体系中中药成分与其药代动力学研究。采用HPLC-MS技术对槐角中的6种黄酮类成分同时进行定量及统计学分析，为槐角的质量控制提供新的手段。药物代谢动力学是定量研究药物在生物体内吸收、分布、代谢和排泄规律，并运用数学原理和方法阐述血药浓度随时间变化规律的一门学科。随着药学相关学科的不断发展及人类健康水平的不断提高，对药物的药代动力学性质的要求也越来越严格。本研究建立大鼠口服槐角提取物后血浆样品中包括槐角苷、染料木苷、染料木素、芦丁、槲皮素、山奈酚在内的6种黄酮的HPLC-MS定量分析方法，探索其药代动力学参数；建立灌胃给予大鼠槐角提取物后，大鼠胆汁和尿液中6种黄酮的定量分析方法，研究其体内排泄规律。本文对槐角药材的多组分分析及药代动力学研究，将有益于临床的合理应用。第一部分液质联用法同时测定槐角中6种成分的含量及统计学分析目的：建立同时分离、测定槐角中槐角苷、染料木苷、染料木素、芦丁、槲皮素和山奈酚6种黄酮类成分的HPLC-MS定量分析方法，并用于槐角药材分析。采用主成分分析及聚类分析的统计方法分类和区分30批不同产地的槐角药材。方法：液相色谱柱为Diamonsil C18柱（150×4.6mm,5μm），流动相为甲醇:水（含有0.5‰乙酸），流速为0.8mL/min，分析时间为8min，梯度洗脱。质谱采用电喷雾离子源（ESI源），TurboV离子源，采用多反应离子监测（MRM）进行负离子检测。源喷射电压（IS）为-4500V，雾化温度为650℃，雾化气（GS1, N2）为60psi，辅助气（GS2, N2）为65psi，气帘气（N2）为25psi。实验采用SPSS统计软件对数据进行统计分析。结果：6种黄酮类化合物的线性关系良好（r≥0.9904），检测限和定量限分别小于3.12ng/mL和12.5ng/mL，日内日间精密度分别小于2.07%和2.44%。平均回收率的范围为96.2%～103.3%，48h内的稳定性良好。主成分分析及聚类分析对30批槐角药材成功分类区分，证明其道地药材质量最佳。结论：该方法简便快速，灵敏度高，选择性好，为槐角药材的质量控制提供了新的方法和手段。第二部分液质联用法同时测定大鼠血浆中6种黄酮类成分及其药代动力学研究目的：建立一种可用于测定大鼠血浆中槐角苷、染料木苷、染料木素、芦丁、槲皮素和山奈酚含量的HPLC-MS方法，并用于大鼠灌胃给予槐角提取物后的药代动力学研究。方法：12只大鼠被随机分为2组。大鼠灌胃给予槐角提取物（2mL/kg）后，分别于给药后0，10，25，45，60，75，90，120，180，270min（第一组）和0，1.5，3，4.5，6，8，10，12，18，24，30，36，48，72h（第二组）眼内眦静脉丛取血，制备血浆样品，采用乙酸乙酯液液萃取法进行样品预处理，磺胺甲噁唑为内标。色谱条件：反相Diamonsil C18柱（150×4.6mm,5μm），流动相为A（甲醇）：B（0.5‰乙酸水），梯度洗脱：0-1.5min，35%A～75%A；1.5-6.0min，75%A～95%A；6.0-8.0min，95%A；后运行8min，柱温为25℃，流速为0.8mL/min。质谱条件：ESI源，源电压（IS）-4500V，源温度（TEM）650℃，雾化气（GS1, N2）60psi，辅助气（GS2,N2）65psi，气帘气（N2）25psi，多反应离子监测（MRM）模式进行负离子检测。采用多反应监测-信息依赖-增强型子离子扫描（MRM-IDA-EPI）模式对6种化合物结构进行确认。6种被测成分及内标的监测离子对分别为sophoricoside （431.1/267.9）， genistin （431.1/267.9）， genistein（269.0/133.0），rutin （609.2/300.0），quercetin （301.0/150.9），kaempferol（284.9/93.0），IS（252.0/155.9）。结果：所建立方法的精密度、准确度、检测限、定量限、稳定性、提取回收率和基质效应均符合要求，被测6种有效成分在测定范围内线性关系良好。药代动力学试验数据表明，被测成分可分为2类，即黄酮苷（槐角苷、染料木苷、芦丁）和黄酮苷元（染料木素、槲皮素、山奈酚）。黄酮苷口服给药后约1h达到血药浓度峰值，而黄酮苷元达到血药浓度峰值约需10～12h。消除速率常数k变化范围：黄酮苷0.0117～0.0201，黄酮苷元0.0011～0.0016。说明口服给药槐角提取物后黄酮苷首先被吸收，然后黄酮苷元再被吸收，且黄酮苷元消除较慢。染料木素出现双峰现象，推测可能与肝肠循环及槐角苷和燃料木苷的代谢有关。结论：本研究采用LC-ESI-MS-MS法，建立了同时测定大鼠血浆中槐角6种有效成分含量的方法，可用于槐角中6种有效成分在大鼠体内的药代动力学研究。该方法简便、快速、灵敏度高、专属性好，可用于槐角6种有效成分在大鼠血浆中的定量分析，该法对槐角药材的体内定量分析具有重要意义，有助于传统中药槐角的临床应用。第三部分液质联用法同时测定大鼠胆汁和尿液中6种黄酮类成分及排泄动力学研究目的：建立HPLC-MS法同时测定大鼠口服槐角提取物后胆汁和尿液中6种黄酮类化合物含量的方法，进行排泄动力学研究。方法：色谱柱为Diamonsil C18柱（150×4.6mm,5μm），流动相为甲醇：水（含有0.5‰乙酸），梯度洗脱，质谱采用电喷雾离子源（ESI源），负离子监测，采用多反应监测模式（MRM）。内标为磺胺甲噁唑（SMZ）。大鼠灌胃给予槐角提取物2.5mL/kg，胆汁按照0-2，2-4，4-6，6-8，8-12，12-24，24-30，30-36h收集，尿液按照0-4，4-8，8-12，12-24，24-36，36-48，48-60，60-72，72-96h时间段收集。样品经乙酸乙酯液液萃取。结果：胆汁和尿液中6种化学成分在测定浓度范围内均具有良好的线性关系（r≥0.9952），日内日间精密度均小于15%，相对误差RE均在±15%内。在胆汁样品中提取回收率范围是64.9%～81.5%，基质效应范围是85.7%～105.5%。尿液样品中提取回收率范围为66.7%～83.2%，基质效应范围为87.4%～103.0%。胆汁及尿液样品稳定性良好。胆汁排泄药动学试验表明，6种黄酮类化合物在36h之内基本排泄完全，累积排泄百分数分别为0.058%，0.712%，0.966%，0.026%，0.261%，0.680%。尿液排泄药动学试验表明，6种化合物在96h基本排泄完全，排泄百分数分别为0.049%，0.156%，0.133%，0.111%，2.763%，2.028%。结论：本研究首次采用HPLC-MS法测定了大鼠胆汁和尿液中槐角6种黄酮类成分，并研究了其排泄动力学。方法准确，结果可靠，可满足中药材在生物基质中的排泄研究。该法对槐角药材的进一步临床应用具有重要意义。