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本文进行了孕酮对NK细胞调控机制及卵巢早衰和多囊卵巢综合症患者中Th17与Treg细胞表达的研究。 背景:妊娠早期,伴随子宫内膜蜕膜化,大量的CD56brightCD16-NK细胞募集到子宫蜕膜处,分化发育成为对建立和维持正常妊娠至关重要的子宫NK细胞(uNK细胞)。而妊娠期间最为关键的激素之一孕酮的水平也有相应的显著改变,提示其可能直接或间接对外周NK细胞以及uNK细胞有作用。目前关于孕酮对NK细胞作用的报道还很少,并且研究表明人和鼠uNK细胞上都不表达孕酮受体,所以有人认为孕酮不能直接作用uNK细胞。但是研究发现人uNK细胞上有糖皮质激素受体(GR)的表达。已有一些研究显示孕酮可以通过GR调控巨噬细胞和树突状细胞,所以我们推测是否P4可以通过GR介导的途径直接调控NK细胞,尤其是影响其产生在妊娠期非常关键的细胞因子IFN-γ。 另外,卵巢早衰(POF)是女性40岁以前卵巢功能衰退、闭经,具有高促性腺激素和低雌激素水平的一种疾病,会导致不孕不育及一系列更年期症状严重危害女性身心健康,影响患者的生活质量。其病因繁多复杂,自身免疫性因素是其中非常重要一种。目前已研究表明多种自身免疫性抗体及免疫细胞尤其是T细胞在其中起重要作用。Th17细胞和Treg细胞被认为分别在炎症和免疫耐受中十分重要,常在多种自身免疫病及非正常妊娠中发现它们失调。而关于Th17细胞和Treg细胞在POF患者中的情况还未有报道。多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄女性常见的一种内分泌紊乱性疾病,目前主要认为胰岛素抵抗与高胰岛素血症可能在其发病中起早期和中心的作用,还未有人研究免疫与PCOS病的关系。 目的:1.本研究试图了解P4对NK细胞活化及细胞因子产生等方面的影响,并探讨其发挥作用的机制和通路,为进一步研究妊娠过程中P4对uNK细胞的调控提供理论依据。 2.分析POF和PCOS患者中Th17与Treg细胞及相关因子表达情况,为从免疫角度进一步研究POF和PCOS提供新的思路和依据。 方法:无菌状态下取小鼠脾脏分离淋巴细胞,流式检测孕酮对小鼠脾脏淋巴细胞中的NK细胞表达CD69和产生IFN-γ的影响。无菌状态下磁珠分离纯化小鼠脾脏NK细胞,实时荧光定量-PCR及流式检测孕酮对其表达CD69和产生IFN-γ的影响。RT-PCR及Westernblotting检测小鼠脾脏NK细胞上孕酮受体(PR)和糖皮质激素受体(GR)的表达情况。实时荧光定量-PCR检测用PR和GR的抑制剂预处理小鼠脾脏NK细胞后孕酮对其转录IFN-γ的影响。Westernblotting检测孕酮对小鼠脾脏NK细胞中STAT4和NFκB活化的影响。流式细胞术检测患者及正常妇女外周血中Th17、Treg细胞的比例。实时定量PCR测定Th17、Treg细胞相关因子IL-17、RORγt、FOXP3、IL-1β、TGF-β、p35、EBI3及IL-6mRNA的表达。 结果:1.孕酮可以抑制小鼠脾脏淋巴细胞中的及纯化出的NK细胞的活化和IFN-γ的产生,孕酮可以通过GR抑制小鼠脾脏NK细胞IFN-γ的转录,孕酮可以抑制STAT4和NF-κB的活化。 2.POF和PCOS患者外周血中的Treg细胞主要是FOXP3+CD4+Treg细胞及Th17细胞占CD4+T细胞的表达比例高于正常妇女,POF患者外周血中Th17细胞与CD4+CD25highFOxP3+Treg细胞的比率明显高于正常妇女;POF和PCOS患者外周血中IL-17、RORγt、FOXP3的mRNA表达高于正常妇女,TGF-β的mRNA表达与正常妇女相比没有明显差异,IL-1β和IL-6的mRNA表达比正常妇女低。 结论:1.孕酮可以不依赖于其他细胞直接抑制小鼠脾脏NK细胞活化和IFN-γ的产生;对IFN-γ转录的抑制作用可以GR由介导,孕酮的抑制作用可能是通过抑制STAT4和NF-κB的活化而实现的。 2.POF患者处于一种Th17细胞占优势的炎症状态,但IL-1β和IL-6在这种炎症状态中并不是优势的细胞因子;PCOS患者的免疫系统也发生了改变,提示免疫功能改变可能影响PCOS的发生。