论文部分内容阅读
目的：为探讨感染诱发MODS的发病机理，本研究以内毒素对肝脏枯否细胞的效应为重点，体外观察内毒素激活枯否细胞的分子机制。进而研究糖皮质激素和热休克对枯否细胞受到内毒素刺激后分泌细胞因子的影响及其机制。观察糖皮质激素和诱发热休克对内毒素血症小鼠肝脏NF-κB活性、表达细胞因子TNFα、IL-6和IL-10 mRNA、及IκBα mRNA和蛋白质表达的影响。以探讨它们对内毒素血症引起器官损伤保护作用的分子机制及其对于器官损伤的可能治疗作用。 方法：胶原酶灌流方法，分离小鼠肝脏枯否细胞。ELISA方法检测体外培养枯否细胞受到LPS刺激后分泌细胞因子TNFα、IL-6和IL-10水平，RT-PCR方法检测相应细胞因子mRNA，并进行半定量分析。采用EMSA方法检测枯否细胞受到LPS刺激后NF-κB活性。Western blot方法检测IκBα和IκBβ表达，同时采用RT-PCR方法检测mRNA表达。观察地塞米松和砷酸钠诱发热休克对枯否细胞受到LPS刺激后分泌细胞因子水平、表达相应细胞因子mRNA，和对NF-κB活性及IκBα蛋白和mRNA表达的影响。观察砷酸钠对TNFα、IL-6、IL-10及IκBβmRNA稳定性的影响。进一步观察地塞米松和热休克对于经腹腔注射LPS(10mg／kg)诱发内毒素血症小鼠肝脏NF-κB活性、表达细胞因子TNFαIL-6和IL-10mRNA、IκBα蛋白及mRNA的影响，同时检测血浆细胞因子水平，HE染色检查各组动物肝脏、肺脏和肾脏组织病变。观察地塞米松和热休克对内毒素血症小鼠24小时死亡率的影响。 结果：(1) 小鼠枯否细胞受到LPS(2.5μg／ml)刺激后，分泌细胞因子TNFα、IL-6和IL-10明显增加，2-6h TNFα和IL-6达到高峰，而IL-10在12h达到高峰，随着IL-10分泌增加，TNFα和IL-6水平逐渐下降。细胞因子mRNA表达与细胞因子分泌呈平行关系。LPS刺激后，很快出现NF-κB活化，在0.5-1h达到高峰，6h减弱，采用未标记的SP-1和NF-κB结合序列寡核苷酸探针进行竞争结合试验，证明结合反应为NF-κB特异性。IκBα出现快速降解(0.5h)，