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蛋白质脯氨酸前的丝氨酸或苏氨酸的可逆磷酸化是一种重要的细胞信号调控机制。近来发现的肽基脯氨酰顺反异构酶Pinl能特异地识别和结合蛋白质磷酸化的丝/苏-脯氨酸基序,催化磷酸化的丝/苏-脯氨酸肽键发生顺反异构,从而改变磷酸化蛋白质的功能。越来越多的研究数据表明这种构型的改变影响了蛋白质的催化活性、去磷酸化水平、蛋白质与蛋白质之间的相互作用、蛋白质的亚细胞定位及蛋白的转运等。而且,这种磷酸化后的调节机制在细胞生长和疾病发生如癌症和阿尔茨海默氏病中起重要作用。但目前对于Pinl的这种催化调节机制、以及其与底物相互作用的研究还很少。
本文主要对人类Pinl蛋白及Pinl的两个关键结构域中的几个关键氨基酸Trp34、Lys63、Cys113、Met130进行定点突变,我们对这些蛋白进行了大量表达、分离、纯化,然后用悬吊液滴蒸汽扩散法制备得到晶体,通过回摆法收集衍射数据并进行晶体结构解析。目前我们得到了Human Pinl-WT、Pinl-W34A、Pinl-K63A、Pinl-C113A、Pinl-M130A。研究结果表明突变体Pinl-W34A对底物磷酸化特异性的识别能力及在体外的催化功能均丧失,而突变体Pinl-K63A、Pinl-C113A其底物磷酸化特异性识别功能不受影响,但它的催化功能丧失;同时,从Pinl-K63A、Pinl-C113A和Pinl-M130A中我们发现PPIase结构域可能存在两个磷酸根结合位点。同时我们成功克隆、表达了只含有PPIase结构域的拟南芥Pinl(AtPinl)、大肠杆菌Pinl(E.coli Par10)和布氏锥虫Pinl(TbPinl),并得到了AtPinl和E.coli Par10的晶体,但因AtPinl和E.coli Par10的晶体质量不高,还需再进行优化;而TbPinl目前还没有得到其晶体。该研究为进一步研究Pinl的作用机制奠定基础,并为以后基于Pinl的新药设计提供结构理论依据。