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人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)是一类无囊膜双链DNA病毒,主要感染宿主的上皮细胞。HPV感染可引发多种良性或恶性病变,如宫颈癌、肛门癌、阴道癌、口咽癌、阴茎癌和各种疣等。HPV18已被确定为最常见的致癌类型之一,宫颈癌样品中HPV18感染率占第二位。通过HPV疫苗的接种,可以刺激免疫系统产生保护性抗体,清除HPV病毒,从而预防由HPV感染引发的癌症的发生。以HPV18单克隆抗体为主要材料研发的试剂盒,是HPV疫苗研发中的重要工具。本论文着重就HPV18型单克隆抗体及试剂盒的研发展开了研究。(1)制备获得产HPV18型蛋白的单克隆抗体的细胞株。经过单抗制备,获得针对HPV18型蛋白阳性的单克隆抗体91株,经过ELISA法进行同源多基因型蛋白的特异性检测及细胞中和检测的方法鉴定,最终选定4C2、6C11等共24株阳性克隆。其中九型范围内特异的阳性克隆12株,中和活性克隆24株,中和且九型范围内特异的克隆12株。(2)成功研发出符合检测标准的试剂盒。经过交叉配对,获得针对HPV18蛋白的配对抗体7对,通过特异性评价、克隆中和活性,克隆腹水得率、克隆纯化抗体活性、克隆酶标抗体活性等检测,最终确定4C2+6C11-HRP的组合为HPV18试剂盒的最终抗体配对。在此基础上,再经过棋盘滴定法确定包被抗体及酶标抗体的最佳使用浓度分别为4ug/ml、2ug/ml。经过抗原包被方式、封闭液、样品作用时间、酶标二抗作用时间、底物作用时间等研究确定双抗夹心ELISA法的最佳条件分别为4℃过夜包被、2%BSA封闭、样品及二抗分别作用60min、显色10min,并建立了试剂盒标准曲线。最后对准确度、精密度、专属性、耐用性、线性及范围等进行了试剂盒方法学验证,开发的试剂盒完全满足药典的相关检测标准和企业内部实际使用需要。