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中国大鲵(Andrias davidianus)属于国家二级保护动物,已被列入《濒危野生动植物国际贸易公约》即CITES公约附录Ⅰ中,属于两栖纲、有尾目、隐鳃鲵科。其特殊地位使其不仅具有较高的科研价值,在医药、食用和观赏等方面也有重要经济价值。然而,关于中国大鲵的研究主要集中在种群分布和生态保护、胚胎发育和生殖系统结构及受精过程、生理生化、遗传学基础性研究等方面,而对于其分子方面的研究却很少。本研究采用RT-PCR和RACE法克隆获得了中国大鲵LHβ的cDNA全序列和LHR基因的3’端cDNA序列,并选取其他一些具有代表性物种的LHβ和LHR基因来建立起系统发育关系树,为进一步探讨中国大鲵的起源和在两栖类中的进化地位提供依据。还利用半定量法分析了这两个基因在不同组织中的表达情况,为两栖类中LHβ和LHR基因的功能、分子进化的研究提供一定的理论依据,为LHβ和LHR基因在体外表达并进一步在提高大鲵繁殖的应用中提供基础。主要研究结果如下：1.根据NCBI中已报道的其他物种LHβ基因和LHR基因的保守序列设计引物,以中国大鲵脑垂体为材料,提取总RNA,并反转录为cDNA,进行PCR扩增,分别扩增出了193bp和182bp的片段。测序后,经核苷酸和氨基酸比对,证明成功克隆到了中国大鲵LH β基因和LHR基因的保守片段。2.本研究采用RT-PCR和RACE技术,以保守序列出发,分别设计了2条特异性引物扩增中国大鲵LHβ基因和LHR基因cDNA的3’端的未知序列。经测序和拼接,分别获得了490bp和1069bp。序列分析表明,中国大鲵LHβ基因3’端cDNA序列编码76个氨基酸,LHR基因3’端cDNA序列编码374个氨基酸。3.采用RT-PCR和RACE技术,根据已获得的3’端序列,分别设计了3条特异性引物扩增中国大鲵LHβ基因和LHR基因cDNA的5’端的未知序列。经测序,仅LHβ基因获得约400bp。拼接LHβ基因序列,得到其全长cDNA893bp。分析表明,中国大鲵LHβ基因全长cDNA序列编码130个氨基酸。4.根据已获得的中国大鲵LHβ全长cDNA序列和LHR基因3’端cDNA序列设计特异引物,分别扩增片段大小为349bp和204bp；以中国大鲵β-actin基因作为内参基因,并根据其已知序列设计特异引物,扩增片段大小为123bp。采用半定量法,构建最优反应体系以研究不同组织中LHβ和LHR基因的表达量,分析结果表明,LHβ、LHR基因在几种组织中均有表达,其中,LHβ、LHR基因均在精巢中表达最高,分别为61%、75%。说明LH在两栖类中的表达同其他一些物种类似,不只有促黄体生成和促进生殖细胞发育的功能,或许还具有其他机制或功能。也为促性腺激素垂体外的表达或许是一种常见的生理现象的假设提供了新证据。