【摘 要】
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目的:本课题旨在测量黄韧带的Smads家族蛋白表达含量,HE染色光镜观察黄韧带的组织形态,揭示肝肾亏虚与腰椎黄韧带退变间的联系,以及腰椎黄韧带Smads蛋白表达量与其组织形态学改变的关系,探讨肝肾亏虚体质在腰椎黄韧带退变的作用机制,将为腰椎黄韧带退行性疾病的治疗提供了理论基础,将来更好使用祖国医学对脊柱退行性疾病进行治疗。方法:选取2020年01月至2021年2月在我院脊柱外科住院且行手术治疗,术
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（项目批准号:81960879）； 广西中医药大学硕士研究生科研创新项目（YCSY2020033）；
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目的:本课题旨在测量黄韧带的Smads家族蛋白表达含量,HE染色光镜观察黄韧带的组织形态,揭示肝肾亏虚与腰椎黄韧带退变间的联系,以及腰椎黄韧带Smads蛋白表达量与其组织形态学改变的关系,探讨肝肾亏虚体质在腰椎黄韧带退变的作用机制,将为腰椎黄韧带退行性疾病的治疗提供了理论基础,将来更好使用祖国医学对脊柱退行性疾病进行治疗。方法:选取2020年01月至2021年2月在我院脊柱外科住院且行手术治疗,术中取出的黄韧带组织共60例。中医诊断为“腰痛”或“腰腿痛”,辨证为肝肾亏虚型为实验组;中医诊断为“腰痛”或“腰腿痛”,辨证为非肝肾亏虚为对照组。术前两组采血患者需空腹12小时以上,抽取5至10m L的静脉血,待室温血液自然凝固10～20分钟,收集上清液,将待用上清液放置于负80度冰箱保存备用,使用酶联免疫吸附试验法检测血清中的性激素含量;实验标本由行后路全椎板切除减压术患者取得,术中取出的黄韧带组织后用无菌的0.9%氯化钠水溶液洗涤,放入准备好的无菌EP管中,将其倒入10%福尔马林溶液中,固定24小时,送至实验室备用;另一试管将收集的黄韧带组织放入液氮中迅速冷冻,转存负80℃冰箱。试管一标本通过HE染色光镜观察两组标本的组织形态。试管二标本通过Western blot法检测两组标本中Smad1、Smad2、Smad7表达情况。实验数据计算采用SPSS22.0软件进行统计学分析。结果:1.肝肾亏虚型黄韧带病理改变:非肝肾亏虚组中可见平行的大量弹性纤维,粗大的弹性纤维沿张力方向平行于直径近似相同的其他纤维束,通常会偏移并连接以传递形成网络结构的分支。在肝肾亏虚的组别,黄韧带纤维的结构受到破坏,弹性纤维不同程度地减少,相对稀疏,走形无规则,局部纤维呈波浪形,变细或断裂,弹性纤维甚至消失。可观察到纤维软骨细胞的增殖,局部胶原纤维可见钙盐沉积。2.肝肾亏虚下性激素改变:发现促卵泡生成素在肝肾亏虚组（29.83±1.33）的表达水平相高于非肝肾亏虚组（12.26±0.93）,P<0.01;血清雌二醇在肝肾亏虚组（12.91±2.87）的表达低于非肝肾亏虚组（32.42±5.04）,P<0.01;睾酮在肝肾亏虚组（22.68±1.65）中表达低于非肝肾亏虚组（26.61±0.93）,P<0.01;孕酮在肝肾亏虚组（0.31±0.05）中表达水平低于非肝肾亏虚组（0.67±0.07）,P<0.01;促黄体生成素、垂体泌乳素在两组中表达量P>0.05,无统计学意义。由此可见性激素的表达在肝肾亏虚组与非肝肾亏虚组之间存在着显著差异,因此推测性激素分泌水平也可以侧面反应肝肾亏虚状态及程度。3.肝肾亏虚型黄韧带中Smads蛋白的改变:数据结果显示,Smad1蛋白在肝肾亏虚组（0.86±0.07）表达量高于非肝肾亏虚组（0.70±0.03）,P<0.05,Smad2蛋白在肝肾亏虚组（0.88±0.03）的表达量高于非肝肾亏虚组（0.71±0.05）,P<0.05,有统计学意义,表明肝肾亏虚与Smad1、Smad2蛋白在黄韧带组织中的表达呈正相关性。Smad7蛋白在肝肾亏虚组（0.62±0.02）表达量低于非肝肾亏虚组（0.87±0.04）,P<0.05,有统计学意义,说明肝肾亏虚与Smad7蛋白在黄韧带组织中的表达呈负相关性。结论:肝肾亏虚可能是加速的黄韧带组织纤维化原因之一;肝肾亏虚的程度可能会影响性激素的表达水平;肝肾亏虚与黄韧带组织中的Smad1、Smad2蛋白表达呈正相关性、与Smad7蛋白的表达呈负相关性。
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