浙江淡竹黑腐病病原菌的鉴定及其防治研究

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浙江淡竹具有适应广、投资省、花工少、成林快、保水保土能力强等特点,其竹杆经加工被制成工艺品和钓鱼竿等产品,销往日本、韩国、东南亚等国家和地区,给种植户、出口创汇企业带来了可观的经济效益。浙江淡竹林主要分布于余杭、德清等地,竹林面积约为6000hm~2,从本世纪初开始,这两地约有1/3的浙江淡竹林,其根基部发黑、腐烂,一般林地株发病率平均为20-30%,重者达80%以上。发病竹竿轻者基部留若干块状烂疤,影响了竹杆的出口,重者则引起枯萎倒竹或退笋,造成了严重的经济损失。在查阅了国内外有关竹子病害的大量文献后,发现这是前人未曾研究与报道过的竹子新病害,并把该病害命名为浙江淡竹黑腐病(Phyllostachys meyeriBlack Rot)。经病原菌的分离、形态学鉴定与致病性试验,由本实验室与国际农业与生物科学研究中心(Centre for Agriculture and Bioscience International,简称CABI)共同鉴定,明确引起该病害的病原菌为一种镰刀菌,其形态特征与木贼镰刀菌Fusarium equiseti(Corda)Saoc基本一致。应用多种分子生物学技术对病原菌进一步鉴定:采用Tox5特异性引物扩增,证实病原菌具有Tox5产毒基因;但用Feq-F/R和FEF1/R1这两对F.equiseti种的特异性引物,病原菌均没有产生特异性扩增条带,表明病原菌与一般的F.equiseti存在着一定的差异:测定病原菌菌株ODF52、OHF02和ODR03的ITS序列全长为468bp,其与GenBank中的F.buharicum和F.beomiforme同源性最高,相似性分别为96.4%和95.9%,但这两种镰刀菌在形态学上与浙江淡竹黑腐病病原菌存在了明显的差异,而与已报道的F.equiseti的同源性最高仅为91.3%;基于ITS和SSR分子标记的系统发育分析也都显示,病原菌菌株与分别来自瑞士、墨西哥、英国、泰国和西班牙的F.equiseti亲缘关系较远。综合形态学与分子鉴定结果,认为该病原菌是木贼镰刀菌一个变种,命名为木贼镰刀菌淡竹变种Fusarium equiseti var.meyeri。对病原菌菌株ODF52的生物学特性进行了研究,明确了培养基、光照、温度、pH值、湿度、碳氮源等因素对菌丝生长、色素变异、产孢和分生孢子萌发的影响。病原菌菌株ODF52在燕麦培养基上的生长速度最快,在PSA培养基上产孢量最多;光照条件下,病原菌能产生明显的色素,黑暗条件能刺激病原菌菌产生分生孢子;菌丝生长温度范围为4-36℃,最适生长温度为28℃:分生孢子萌发的最高和最低温度分别是30℃和15℃,最适萌发温度为20℃;菌丝和分生孢子的致死温度分别为52℃(15min)和48℃(15min);菌丝和分生孢子在pH值3-12的环境下都能生长和萌发,菌丝最适生长pH值为6,分生孢子最适萌发pH值为5-6;分生孢子在相对湿度低于90%时不能萌发;菌丝生长的最佳碳氮源分别是葡萄糖和酵母粉,最佳碳氮比为50:1,而分生孢子萌发的最佳碳氮源分别为果糖和蛋白胨。通过室内药剂试验、林地小区和中试试验表明:防治该病害的有效而经济的杀菌剂主要有70%甲基托布津WP、40%根腐宁WP和50%多菌灵WP,可轮换使用;并明确了防治适期、防治次数和施药方式,有水源的林地,在出笋前用杀菌剂喷洒林地:水源缺乏的林地,出笋前在林地撤毒土,老病区与重病区最好在出笋当年与出笋次年连防二次。对生防菌寡雄腐霉Pythium oligandrum菌株Rcul、哈茨木霉Trichodermaharzianum菌株T6、T9、T10、T25、T34和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌株B1、B3抑制病原菌菌株ODF52的拮抗效果及机理进行了初步研究,结果表明这些菌株对病原菌ODF52都具有不同程度的抑制作用。P.oligandrum菌株Rcul能引起病原菌菌丝的溶解与破裂,但寡雄腐霉分泌物(<8kD)对病原菌无明显的抑制作用;T.harzianum菌株T34主要通过重寄生和分泌抗生物质抑制病原菌的生长;B.subtilis菌株B1和B3能抑制病原菌的生长,可见明显的抑菌带。
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