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目的:喉癌是耳鼻咽喉-头颈外科常见的恶性肿瘤之一。喉癌的发生与其它恶性肿瘤一样,是由多种基因的表达水平的改变而引起的。伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(reversion-inducing-cystein-rich protein with kazalmotifs,RECK)基因是近年来新发现的转录抑制基因,可以通过抑制多种MMPs的表达,抑制肿瘤的侵袭及转移。基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)可以降解细胞外基质,有研究表明,MMP2的表达水平同肿瘤的侵袭和恶性程度密切相关, TIMP-2作为MMP-2的抑制剂,通过多种方式抑制MMP-2的活性。同时RECK受到P21ras等多种癌基因的调控。本研究通过测定RECK、MMP-2、TIMP-2和P21ras在喉癌、癌旁及正常组织中的表达及其相互关系,探讨喉癌的发生及其侵袭转移。方法:1应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)S-P法检测40例喉癌组织、15例癌旁组织和15例正常喉粘膜中RECK及MMP-2、TIMP-2、P21ras的表达情况。2应用流式细胞术(Flow Cytometrye, FCM)的方法定量检测40例喉癌组织、15例癌旁组织和15例正常喉粘膜组织中RECK及MMP-2、TIMP-2的含量。3运用统计软件SPSS13.0对数据进行统计分析。以P≤0.05为差异在统计学上有显著性意义,P≤0.01为差异在统计学上有非常显著性意义。结果:1 RECK蛋白的表达1.1免疫组化法:应用S-P法检测喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中RECK的表达强度呈上升趋势,三组相比有显著性差异(P<0.01)。进一步两两比较,喉癌组织中的RECK表达均低于正常组(P<0.01)与癌旁组(P<0.01),而正常组与癌旁组相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,RECK蛋白表达与淋巴结转移(P<0.05)、临床分期(P<0.01)及病理分级(P<0.05)有关,而与临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。1.2流式细胞术:检测RECK蛋白在喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中的表达量(FI值)分别为0.8682±0.1961、0.9889±0.1785、1.1200±0.1153,三组相比有显著性差异(P<0.01)。喉癌组织中RECK蛋白的表达量明显低于癌旁组织(P<0.01)及正常喉粘膜组织(P<0.01),而癌旁组织与正常喉粘膜相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,RECK蛋白表达与淋巴结转移(P<0.05)、临床分期(P<0.01)及病理分级(P<0.05)有关。2 MMP-2蛋白的表达2.1免疫组化法:应用S-P法检测喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中MMP-2蛋白的表达强度呈下降趋势,三组相比有显著性差异(P<0.01)。进一步两两比较,喉癌组MMP-2蛋白的表达高于正常组(P<0.01)与癌旁组(P<0.01),而正常组与癌旁组相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,MMP-2蛋白表达与淋巴结转移(P<0.05)、临床分期(P<0.01)及病理分级(P<0.01)有关,与临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。2.2流式细胞术:检测MMP-2蛋白在喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中的表达量(FI值)分别为2.6088±0.1954、1.0322±0.1577、0.6811±0.1732,相比三组相比有显著性差异(P<0.01)。喉癌组织中MMP-2蛋白的表达量明显高于癌旁组织(P<0.01)及正常喉粘膜组织(P <0.01),而癌旁组织与正常喉粘膜相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,MMP-2蛋白表达与淋巴结转移(P<0.05)、临床分期(P<0.01)及病理分级(P<0.01)有关。3 TIMP-2蛋白的表达3.1免疫组化法:应用S-P法检测喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中TIMP-2的表达强度呈下降趋势,三组相比有显著性差异(P<0.01)。进一步两两比较,喉癌组织中的TIMP-2表达均高于正常组(P<0.01)与癌旁组(P<0.01),而正常组与癌旁组相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,TIMP-2蛋白表达与淋巴结转移(P<0.01)、临床分期(P<0.01)及病理分级(P<0.01)有关,而与临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。3.2流式细胞术:检测TIMP-2蛋白在喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中的表达量(FI值)分别为3.6077±0.1966、1.1125±0.1672、0.6080±0.1987,三组相比有显著性差异(P<0.01)。喉癌组织中TIMP-2蛋白的表达量明显高于癌旁组织(P<0.01)及正常喉粘膜组织(P<0.01),而癌旁组织与正常喉粘膜相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,TIMP-2蛋白表达与淋巴结转移(P<0.01)、临床分期(P<0.01)及病理分级(P<0.01)有关。4 P21ras蛋白的表达:应用S-P法检测喉癌组织、癌旁组织及正常粘膜中P21ras的表达强度呈下降趋势,三组相比有显著性差异(P<0.01)。进一步两两比较,喉癌组织中的P21ras表达均高于正常组(P<0.01)与癌旁组(P<0.01),而正常组与癌旁组相比无显著性差异(P>0.05)。在喉癌组织中,P21ras蛋白表达与淋巴结转移(P<0.01)、临床分期(P<0.05)及病理分级(P<0.01)有关,而与临床分型、肿瘤大小、吸烟量、年龄和性别无关(P>0.05)。5 RECK与MMP-2、TIMP-2、P21ras在喉癌组织中的相关性5.1 RECK与MMP-2的相关性:RECK蛋白表达量(FI值)与MMP-2蛋白表达量(FI值)呈直线负相关,直线回归方程Y=-2.206X+4.076(r=0.895,P=0.000)。5.2 RECK与TIMP-2无相关性(r=-0.208,P=0.198>0.05)。5.3 RECK与P21ras呈负相关(r=-0.332,P=0.036<0.05)。结论:1 RECK蛋白、MMP-2蛋白、TIMP-2蛋白和P21ras蛋白在喉癌组织、癌旁组织及正常喉粘膜组织中均有表达。2 MMP-2蛋白、TIMP-2蛋白和P21ras蛋白在喉癌组织中的定性表达均明显高于癌旁组织及正常喉粘膜组织,RECK蛋白在喉癌组织中的定量及定性表达均明显低于癌旁组织及正常喉粘膜组织,可能与喉癌的发生有关。3 RECK蛋白、MMP-2蛋白、TIMP-2蛋白和P21ras蛋白在喉癌组织中的表达与临床分期、淋巴结转移、病理分级有相关性;与临床分型、肿瘤大小、年龄、吸烟量和性别无关。提示四种蛋白可能与喉癌的侵袭与转移有关。4 RECK和MMP-2在喉癌组织中的蛋白表达呈直线负相关,RECK与TIMP-2无直线相关性,RECK与P21ras呈直线负相关,提示四种蛋白之间存在相互调节、相互作用。