【摘 要】
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紫茎泽兰作为一种入侵性毒草,严重危害着我国农林牧业的发展。内生菌是活性代谢产物的重要来源。本实验室从紫茎泽兰中成功分离到95株内生细菌,本研究旨在从中筛选出潜在的益生内生细菌,并评估其对高脂饮食小鼠肠道完整性的保护作用。采用形态学观察、生理生化测定、系统发育及扩增16S r DNA序列分析,该内生菌鉴定为东洋芽孢杆菌（Bacillus toyonensis）,命名为Bacillus toyonen
【基金项目】
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四川省科技厅重大科技专项（2020YFS0337）；
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紫茎泽兰作为一种入侵性毒草,严重危害着我国农林牧业的发展。内生菌是活性代谢产物的重要来源。本实验室从紫茎泽兰中成功分离到95株内生细菌,本研究旨在从中筛选出潜在的益生内生细菌,并评估其对高脂饮食小鼠肠道完整性的保护作用。采用形态学观察、生理生化测定、系统发育及扩增16S r DNA序列分析,该内生菌鉴定为东洋芽孢杆菌（Bacillus toyonensis）,命名为Bacillus toyonensis SAU-19（B.toyo SAU-19）。本研究获得的16S r DNA序列上传至Gen Bank数据库,登录号为MW287198。在体内实验中,将48只小鼠随机分为4组:对照组饲喂正常饲粮+0.9%1m L生理盐水（NC）、饲喂高脂饲粮+0.9%1m L生理盐水（HF）、饲喂高脂饲粮+1m L 10~6CFU/m L商业益生菌（LGG）和饲喂高脂饲粮+1m L 10~6CFU/m L B.toyo SAU-19组（HF+B.toyo SAU-19）,连续灌胃给药35天。每周记录小鼠的采食量、饲料转化率及体重。试验期结束后,采用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒测定二胺氧化酶DAO活性（血清）、抗氧化能力（血清和肠道）、s Ig A含量（小肠内容物）。此外,通过选择性培养基对小肠和盲肠内容物中的细菌（大肠杆菌、沙门菌、葡萄球菌和乳酸杆菌）进行计数。最后,采用实时荧光定量聚合酶链反应（q RT-PCR）和ELISA检测小肠组织中紧密连接蛋白（Occludin和ZO-1）和炎症相关细胞因子（IL-1β、TFN-α、IL-2、IL-4和IL-10）的m RNA和蛋白表达。结果表明:1.紫茎泽兰Bacillus toyonensis SAU-19的分离鉴定。通过细菌形态学和生化试验,紫茎泽兰叶中分离的Bacillus toyonensis SAU-19为革兰阳性细菌,过氧化氢酶阴性,棒状,糖发酵（葡萄糖、蔗糖和D-蔗糖）,在不同p H值（2.5、4.5和6.5）、胆汁盐浓度（0、0.2和0.4%）、Na Cl浓度（0、2、4和6.5%）均能生长。Bacillus toyonensis SAU-19对红霉素和氨苄西林耐药,对大肠杆菌和鼠伤寒沙门菌的生长无抑制作用。2.Bacillus toyonensis SAU-19抑制高脂饮食小鼠的体重增加和改善抗氧化状态。与高脂饲粮组相比,B.toyo SAU-19组显著抑制高脂饲粮引起的增重（P＜0.05）,但正常对照组、LGG组和B.toyo SAU-19组的增重差异不显著（P＞0.05）。此外,与高脂饲粮组相比,B.toyo SAU-19显著抑制小鼠血清、肠道组织中MDA活性的升高及SOD、CAT和GSH水平的降低（P＜0.05）,LGG组与B.toyo SAU-19组的氧化应激水平和抗氧化指标无显著差异（P＞0.05）。各组采食量无显著差异（P＞0.05）。3.B.toyo SAU-19对高脂饮食小鼠肠道结构损伤和肠通透性有明显的保护作用。与高脂饲粮组相比,B.toyo SAU-19显著抑制小鼠血清DAO产量的增加（P＜0.05）,但LGG组与Bacillus toyonensis组之间DAO水平无显著差异（P＞0.05）。通过组织病理学和形态学结果表明:与高脂饲粮组相比,B.toyo SAU-19组小肠结构（绒毛高度和隐窝深度）完整,其病理变化明显减轻（P＜0.05）。LGG组与B.toyo SAU-19组显著降低小肠s Ig A含量和小肠组织紧密连接蛋白（Occludin和Z0-1）m RNA的表达量（P＜0.05）。结果表明:与高脂饲粮组相比,Bacillus toyonensis SAU-19和LGG显著抑制小肠组织促炎细胞因子（IL-1β、TFN-α）产生,维持其抗炎相关细胞因子（IL-4和IL-10）m RNA和蛋白（ELISA）水平（P＜0.05）。4.B.toyo SAU-19调节高脂饮食小鼠的肠道微生物群。结果表明:与高脂饲粮组相比,B.toyo SAU-19显著降低高脂饮食小鼠小肠和盲肠中的致病菌（大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌）数量,增加其有益细菌（乳酸杆菌）数量（P＜0.05）。LGG组和B.Toyo SAU-19组的致病菌和有益细菌组成未见显著差异（P＞0.05）。结论:从紫茎泽兰中分离到的B.toyo SAU-19可以改善高脂饮食小鼠过度增重,改善抗氧化状态,减轻肠道结构和完整性损伤,并减少大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌等肠道菌群,增加高脂饮食喂养的小鼠肠道中有益细菌（如乳酸杆菌）的数量,可作为人类和动物的潜在益生菌。
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